مېتابولومىكلار بىمار قان زەردابىنىڭ يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى ماسسا سپېكترومېتىرىيەلىك ئانالىزى ئارقىلىق يۇقىرى ئۆزگىچەلىك بىلەن ياخشى ۋە يامان سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى پەرقلەندۈرىدۇ.

كومپيۇتېر توموگرافىيەسى (CT) ئارقىلىق ئېنىقلانغان ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى پەرقلەندۈرۈش كلىنىكىلىق ئەمەلىيەتتىكى قىيىن مەسىلە بولۇپ قالدى. بۇ يەردە، بىز ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى، ياخشى سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى ۋە I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى قاتارلىق 480 قان زەردابى ئەۋرىشكىسىنىڭ ئومۇمىي مېتابولومىنى خاراكتېرلەندۈرىمىز. ئادېنوكارسىنومىلار ئۆزگىچە ماددا ئالمىشىش پروفېلىنى كۆرسىتىدۇ، ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر بىلەن ساغلام كىشىلەرنىڭ ماددا ئالمىشىش پروفېلى يۇقىرى ئوخشاشلىققا ئىگە. بايقاش گۇرۇپپىسىدا (n = 306)، ياخشى سۈپەتلىك ۋە يامان سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن 27 خىل مېتابولىت بايقالغان. ئىچكى دەلىللەش (n = 104) ۋە تاشقى دەلىللەش (n = 111) گۇرۇپپىلىرىدىكى پەرقلەندۈرۈش مودېلىنىڭ AUC قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 0.915 ۋە 0.945 بولغان. يول ئانالىزىدا، ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر ۋە ساغلام كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا، ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى قان زەردابىدىكى تىرىپتوفاننىڭ ئازىيىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گلىكولىزلىق مېتابولىتلارنىڭ كۆپىيىشى بايقالغان، ھەمدە تىرىپتوفاننىڭ قوبۇل قىلىنىشى ئۆپكە راكى ھۈجەيرىلىرىدە گلىكولىزنى ئىلگىرى سۈرىدىغانلىقىنى ئوتتۇرىغا قويغان. بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز كومپيۇتېر توموگرافىيەسى ئارقىلىق بايقالغان ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ خەۋپ-خەتىرىنى باھالاشتا قان زەردابىدىكى مېتابولىت بىئوماركېرلىرىنىڭ قىممىتىنى گەۋدىلەندۈرىدۇ.
راك كېسىلى بىمارلىرىنىڭ ياشاش نىسبىتىنى يۇقىرى كۆتۈرۈشتە بالدۇر دىئاگنوز قويۇش ئىنتايىن مۇھىم. ئامېرىكا دۆلەتلىك ئۆپكە راكىنى تەكشۈرۈش سىنىقى (NLST) ۋە ياۋروپا NELSON تەتقىقاتىنىڭ نەتىجىلىرى تۆۋەن مىقداردىكى كومپيۇتېر توموگرافىيەسى (LDCT) بىلەن تەكشۈرۈشنىڭ يۇقىرى خەۋپلىك گۇرۇپپىلاردا ئۆپكە راكىدىن ئۆلۈش نىسبىتىنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى1،2،3. ئۆپكە راكىنى تەكشۈرۈشتە LDCT كەڭ قوللىنىلغاندىن بۇيان، ئالامەتسىز ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ تاسادىپىي رادىئوگرافىيەلىك بايقاش نىسبىتى ئۈزلۈكسىز ئېشىپ باردى4. ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى دىئامېتىرى 3 سانتىمېتىرغىچە بولغان مەركەزلىك تۇتۇقلۇق دەپ ئېنىقلىنىدۇ5. بىز يامان سۈپەتلىك ئۆسمە ئېھتىماللىقىنى باھالاشتا ۋە LDCT دا تاسادىپىي بايقالغان كۆپ ساندىكى ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى بىر تەرەپ قىلىشتا قىيىنچىلىققا دۇچ كېلىۋاتىمىز. CT نىڭ چەكلىمىلىرى دائىملىق ئىز قوغلاش تەكشۈرۈشلىرى ۋە يالغان مۇسبەت نەتىجىلەرنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ، كېرەكسىز ئارىلىشىش ۋە ئارتۇقچە داۋالاشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ6. شۇڭا، ئۆپكە راكىنى دەسلەپكى باسقۇچتا توغرا ئېنىقلاش ۋە دەسلەپكى بايقاشتا كۆپىنچە ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن ئىشەنچلىك ۋە پايدىلىق بىئو بەلگىلەرنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا ئېھتىياج بار7.
قاننىڭ (قان زەردابى، پلازما، قان مونونۇكلېئار ھۈجەيرىلىرى) ئۇنىۋېرسال مولېكۇلا ئانالىزى، بۇنىڭ ئىچىدە گېنومىك، پروتېئومىك ياكى DNA مېتىللىنىشى8،9،10 بار، ئۆپكە راكىنىڭ دىئاگنوز قويۇش بىئو بەلگىلىرىنى بايقاشقا بولغان قىزىقىشنىڭ ئېشىشىغا سەۋەب بولدى. شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا، مېتابولومىك ئۇسۇللىرى ئىچكى ۋە تاشقى تەسىرلەرنىڭ تەسىرىگە ئۇچرىغان ھۈجەيرە ئاخىرقى مەھسۇلاتلىرىنى ئۆلچەيدۇ، شۇڭا كېسەللىكنىڭ باشلىنىشى ۋە نەتىجىسىنى مۆلچەرلەشكە ئىشلىتىلىدۇ. سۇيۇق خروماتوگرافىيە-تاندېم ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (LC-MS) يۇقىرى سەزگۈرلۈك ۋە كەڭ دىنامىك دائىرىسى سەۋەبىدىن مېتابولومىك تەتقىقاتىدا كەڭ قوللىنىلىدىغان ئۇسۇل بولۇپ، ئۇ ئوخشىمىغان فىزىكىلىق-خىمىيىلىك خۇسۇسىيەتكە ئىگە مېتابولىتلارنى ئۆز ئىچىگە ئالالايدۇ11،12،13. پلازما/قان زەردابىنىڭ ئومۇمىي مېتابولومىك ئانالىزى ئۆپكە راكىنى دىئاگنوز قويۇش14،15،16،17 ۋە داۋالاش ئۈنۈمى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بىئو بەلگىلەرنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن بولسىمۇ،18 قان زەردابى مېتابولىت تۈرگە ئايرىش ئۇسۇلى ياخشى ۋە يامان سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن يەنىلا نۇرغۇن تەتقىق قىلىنىشى كېرەك. - زور كۆلەملىك تەتقىقات.
ئادېنوكارسىنوما ۋە ياپىلاق ھۈجەيرە راكى كىچىك ھۈجەيرىلىك بولمىغان ئۆپكە راكىنىڭ (NSCLC) ئىككى ئاساسلىق تۈرى. ھەر خىل CT تەكشۈرۈش سىناقلىرى ئادېنوكارسىنومانىڭ ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان گىستولوگىيەلىك ئۆپكە راكى تۈرى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ1،19،20،21. بۇ تەتقىقاتتا، بىز ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى، ياخشى سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى ۋە CT دا بايقالغان ≤3cm قاتارلىق جەمئىي 695 قان زەردابى ئەۋرىشكىسىدە مېتابولومىك ئانالىز ئېلىپ بېرىش ئۈچۈن ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (UPLC-HRMS) نى ئىشلەتتۇق. I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىنى تەكشۈرۈش. بىز ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىنى ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر ۋە ساغلام كونترول گۇرۇپپىسىدىن پەرقلەندۈرىدىغان قان زەردابىدىكى مېتابولىتلار گۇرۇپپىسىنى بايقىدۇق. يولنى بايىتىش ئانالىزى ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىدا ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر ۋە ساغلام كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا نورمالسىز تىرىپتوفان ۋە گلۇكوزا مېتابولىزمىنىڭ كۆپ ئۇچرايدىغان ئۆزگىرىش ئىكەنلىكىنى ئاشكارىلىدى. ئاخىرىدا، بىز LDCT ئارقىلىق بايقالغان يامان سۈپەتلىك ۋە ياخشى سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن يۇقىرى ئۆزگىچەلىك ۋە سەزگۈرلۈككە ئىگە قان زەردابى ماددا ئالمىشىش سىنىپلىغۇچىسىنى قۇرۇپ چىقتۇق ۋە جەزملەشتۈردۇق، بۇ بالدۇر پەرقلەندۈرۈش دىئاگنوزى قويۇش ۋە خەۋپنى باھالاشقا ياردەم بېرىشى مۇمكىن.
بۇ تەتقىقاتتا، جىنىس ۋە ياش جەھەتتىن ماس كېلىدىغان قان زەردابى ئەۋرىشكىلىرى 174 ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى، 292 ياخشى سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنى بار بىمار ۋە 229 I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى بار بىماردىن قايتا-قايتا توپلاندى. 695 سىناق قىلىنغۇچىنىڭ نوپۇس ئالاھىدىلىكى قوشۇمچە جەدۋەل 1 دە كۆرسىتىلدى.
1a-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك مەركىزىدە جەمئىي 480 قان زەردابى ئەۋرىشكىسى، بۇنىڭ ئىچىدە 174 ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى (HC)، 170 ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچە (BN) ۋە 136 I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنوما (LA) ئەۋرىشكىسى توپلانغان. ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (UPLC-HRMS) ئارقىلىق نىشانسىز مېتابولومىيە پروفىلىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن تەتقىقات گۇرۇپپىسى. قوشۇمچە 1-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، تۈرگە ئايرىش مودېلىنى قۇرۇش ۋە پەرقلىق يول ئانالىزىنى تېخىمۇ تەتقىق قىلىش ئۈچۈن LA بىلەن HC، LA ۋە BN ئوتتۇرىسىدىكى پەرقلىق مېتابولىتلار ئېنىقلاندى. سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك مەركىزى تەرىپىدىن توپلانغان 104 ئەۋرىشكە ۋە باشقا ئىككى دوختۇرخانىدىن توپلانغان 111 ئەۋرىشكە ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئىچكى ۋە تاشقى دەلىللەشتىن ئۆتتى.
a بايقاش گۇرۇپپىسىدىكى تەتقىقات توپى ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (UPLC-HRMS) ئارقىلىق دۇنياۋى قان زەردابى مېتابولومىكىسى ئانالىزىدىن ئۆتتى. b ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى (HC, n = 174)، ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر (BN, n = 170) ۋە I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى (لوس ئانژېلېس, n = 136) قاتارلىق تەتقىقات گۇرۇپپىسىدىكى 480 قان زەردابى ئەۋرىشكىسىنىڭ ئومۇمىي مېتابولومىنىڭ قىسمەن ئەڭ كىچىك كۋادرات پەرقلەندۈرۈش ئانالىزى (PLS-DA). +ESI، مۇسبەت ئېلېكترو پۈركۈش ئىئونلىشىش ھالىتى، -ESI، مەنپىي ئېلېكترو پۈركۈش ئىئونلىشىش ھالىتى. c–e ئىككى بېرىلگەن گۇرۇپپىدىكى مىقدارى كۆرۈنەرلىك پەرقلىق مېتابولىتلار (ئىككى قۇيرۇقلۇق ۋىلكوكسون ئىمزالىق دەرىجە سىنىقى، يالغان بايقاش سۈرئىتى تەڭشەلگەن p قىممىتى، FDR <0.05) قىزىل (قاتلىنىش ئۆزگىرىشى > 1.2) ۋە كۆك (قاتلىنىش ئۆزگىرىشى < 0.83) بىلەن كۆرسىتىلدى. . ) ۋولقان گىرافىكىدا كۆرسىتىلدى. f LA ۋە BN ئوتتۇرىسىدىكى ئىزاھلانغان مېتابولىتلارنىڭ سانىدىكى مۇھىم پەرقنى كۆرسىتىپ بېرىدىغان ئىئېرارخىيەلىك توپلاش ئىسسىقلىق خەرىتىسى. مەنبە سانلىق مەلۇماتلىرى مەنبە سانلىق مەلۇمات ھۆججىتى شەكلىدە تەمىنلىنىدۇ.
بايقاش گۇرۇپپىسىدىكى 174 HC، 170 BN ۋە 136 LA نىڭ ئومۇمىي قان زەردابى مېتابولومىسى UPLC-HRMS ئانالىزى ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى. بىز ئالدى بىلەن سۈپەت كونترول (QC) ئەۋرىشكىلىرىنىڭ نازارەت قىلىنمىغان ئاساسلىق تەركىب ئانالىزى (PCA) مودېلىنىڭ مەركىزىگە زىچ توپلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ، نۆۋەتتىكى تەتقىقاتنىڭ ئۈنۈمىنىڭ مۇقىملىقىنى جەزملەشتۈردۇق (قوشۇمچە رەسىم 2).
1b-رەسىمدىكى قىسمەن ئەڭ كىچىك كۋادرات پەرقلەندۈرۈش ئانالىزىدا (PLS-DA) كۆرسىتىلگەندەك، بىز مۇسبەت (+ESI) ۋە مەنپىي (−ESI) ئېلېكترو پۈركۈش ئىئونلىشىش ھالىتىدە LA بىلەن BN، LA بىلەن HC ئوتتۇرىسىدا روشەن پەرق بارلىقىنى بايقىدۇق. قانداقلا بولمىسۇن، +ESI ۋە -ESI شارائىتىدا BN بىلەن HC ئوتتۇرىسىدا مۇھىم پەرق بايقالمىغان.
بىز LA بىلەن HC ئوتتۇرىسىدا 382 پەرقلىق ئالاھىدىلىك، LA بىلەن BN ئوتتۇرىسىدا 231 پەرقلىق ئالاھىدىلىك ۋە BN بىلەن HC ئوتتۇرىسىدا 95 پەرقلىق ئالاھىدىلىكنى بايقىدۇق (Wilcoxon ئىمزالىق دەرىجە سىنىقى، FDR <0.05 ۋە كۆپ ئۆزگىرىش >1.2 ياكى <0.83) (.1c-e-رەسىم). . چوققىلار سانلىق مەلۇمات ئامبىرىغا (mzCloud/HMDB/Chemspider كۈتۈپخانىسى) سېلىشتۇرغاندا m/z قىممىتى، ساقلاش ۋاقتى ۋە پارچىلىنىش ماسسا سپېكتىرى ئىزدەش (تەپسىلاتلار ئۇسۇللار بۆلىكىدە بايان قىلىنغان) ئارقىلىق تېخىمۇ ئىزاھلاندى (قوشۇمچە سانلىق مەلۇمات 3). ئاخىرىدا، LA بىلەن BN نى سېلىشتۇرۇشتا (1f-رەسىم ۋە قوشۇمچە جەدۋەل 2) ۋە LA بىلەن HC نى سېلىشتۇرۇشتا (قوشۇمچە رەسىم 3 ۋە قوشۇمچە جەدۋەل 2) موللۇقى جەھەتتە كۆرۈنەرلىك پەرقلەرگە ئىگە 33 ۋە 38 ئىزاھلانغان مېتابولىت ئايرىم-ئايرىم ھالدا بايقالدى. ئەكسىچە، BN بىلەن HC دا موللۇقى جەھەتتە كۆرۈنەرلىك پەرقلەرگە ئىگە پەقەت 3 مېتابولىت بايقالدى (قوشۇمچە جەدۋەل 2)، بۇ PLS-DA دىكى BN بىلەن HC نىڭ قاپلىنىشىغا ماس كېلىدۇ. بۇ پەرقلىق مېتابولىتلار كەڭ دائىرىلىك بىئوخىمىيىلىك ماددىلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ (قوشۇمچە رەسىم 4). بۇ نەتىجىلەر بىرلىكتە قارىغاندا، دەسلەپكى باسقۇچتىكى ئۆپكە راكىنىڭ يامان سۈپەتلىك ئۆزگىرىشىنى ئەكىس ئەتتۈرىدىغان قان زەردابى مېتابولومىدا مۇھىم ئۆزگىرىشلەرنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ ئۆزگىرىشلەر ياخشى سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى ياكى ساغلام كىشىلەرگە سېلىشتۇرغاندا يۈز بېرىدۇ. شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا، BN ۋە HC نىڭ قان زەردابى مېتابولومىنىڭ ئوخشاشلىقى ياخشى سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ ساغلام كىشىلەر بىلەن نۇرغۇن بىئولوگىيىلىك ئالاھىدىلىكلەرگە ئىگە بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. ئېپىدېرمال ئۆسۈش ئامىلى قوبۇللىغۇچىسى (EGFR) گېنى مۇتاتسىيەسى ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىنىڭ 23-تۈرلۈكىدە كۆپ ئۇچرايدىغانلىقىنى نەزەرگە ئېلىپ، بىز قوزغاتقۇچ مۇتاتسىيەسىنىڭ قان زەردابى مېتابولومىغا بولغان تەسىرىنى ئېنىقلاشقا تىرىشتۇق. ئاندىن ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى گۇرۇپپىسىدىكى EGFR ھالىتىگە ئىگە 72 بىمارنىڭ ئومۇمىي مېتابولومىيە ئارخىپىنى تەھلىل قىلدۇق. قىزىقارلىقى شۇكى، PCA ئانالىزىدا EGFR مۇتانت بىمارلىرى (n = 41) بىلەن EGFR ياۋا تىپلىق بىمارلار (n = 31) ئوتتۇرىسىدا ئوخشاش ئارخىپلارنى تاپتۇق (قوشۇمچە رەسىم 5a). قانداقلا بولمىسۇن، بىز EGFR مۇتاتسىيەسى بار بىمارلاردا، ياۋا تىپتىكى EGFR بار بىمارلارغا سېلىشتۇرغاندا، مىقدارى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئۆزگەرگەن 7 خىل مېتابولىتنى بايقىدۇق (t سىنىقى، p < 0.05 ۋە قاتلىنىش ئۆزگىرىشى > 1.2 ياكى < 0.83) (قوشۇمچە رەسىم 5b). بۇ مېتابولىتلارنىڭ كۆپ قىسمى (7 نىڭ 5 ى) ئاتسىلكارنىتىن بولۇپ، ئۇلار ياغ كىسلاتاسىنىڭ ئوكسىدلىنىش يوللىرىدا مۇھىم رول ئوينايدۇ.
رەسىم 2a دا كۆرسىتىلگەن خىزمەت ئېقىمىدا كۆرسىتىلگەندەك، تۈگۈنچە تۈرگە ئايرىش ئۈچۈن بىئو بەلگىلەر ئەڭ ئاز مۇتلەق قىسقىراش ئوپېراتورى ۋە LA (n = 136) ۋە BN (n = 170) دا بايقالغان 33 خىل پەرقلىق مېتابولىتقا ئاساسەن تاللاش ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلدى. ئەڭ ياخشى ئۆزگەرگۈچى مىقدار بىرىكمىسى (LASSO) – ئىككىلىك لوگىكىلىق رېگرېسسىيە مودېلى. مودېلنىڭ ئىشەنچلىكلىكىنى سىناش ئۈچۈن ئون ھەسسە كېسىشمە تەكشۈرۈش ئىشلىتىلدى. ئۆزگەرگۈچى مىقدار تاللاش ۋە پارامېتىرنى تەڭشەش λ24 پارامېتىرى بىلەن ئېھتىماللىقنى ئەڭ چوڭلاشتۇرۇش جازاسى ئارقىلىق تەڭشىلىنىدۇ. ئايرىملاش مودېلىنىڭ تۈرگە ئايرىش ئىقتىدارىنى سىناش ئۈچۈن ئىچكى تەكشۈرۈش (n = 104) ۋە تاشقى تەكشۈرۈش (n = 111) گۇرۇپپىلىرىدا دۇنياۋى مېتابولومىك ئانالىزى مۇستەقىل ھالدا ئېلىپ بېرىلدى. نەتىجىدە، بايقاش توپلىمىدىكى 27 خىل مېتابولىت ئوتتۇرىچە AUC قىممىتى ئەڭ چوڭ بولغان ئەڭ ياخشى ئايرىملاش مودېلى دەپ بېكىتىلدى (رەسىم 2b)، بۇنىڭ ئىچىدە 9 نىڭ LA دىكى پائالىيىتى BN غا سېلىشتۇرغاندا ئاشقان، 18 نىڭ پائالىيىتى تۆۋەنلىگەن (رەسىم 2c).
ئۆپكە تۈگۈنىنى تۈرگە ئايرىغۇچنى قۇرۇش ئۈچۈن خىزمەت ئېقىمى، بۇنىڭ ئىچىدە ئون ھەسسە كېسىشمە تەكشۈرۈش ئارقىلىق ئىككىلىك لوگىكىلىق رېگرېسسىيە مودېلى ئارقىلىق بايقاش توپلىمىدىكى ئەڭ ياخشى قان زەردابى مېتابولىتلىرى تاختىسىنى تاللاش ۋە ئىچكى ۋە تاشقى تەكشۈرۈش توپلىمىدىكى ئالدىن پەرەز قىلىش ئىقتىدارىنى باھالاش قاتارلىقلار بار. b مېتابولىزم بىئوماركېر تاللاش ئۈچۈن LASSO رېگرېسسىيە مودېلىنىڭ كېسىشمە تەكشۈرۈش ستاتىستىكىسى. يۇقىرىدا بېرىلگەن سانلار بېرىلگەن λ دا تاللانغان بىئوماركېرلارنىڭ ئوتتۇرىچە سانىنى كۆرسىتىدۇ. قىزىل نۇقتىلىق سىزىق ماس كېلىدىغان لامبدادىكى ئوتتۇرىچە AUC قىممىتىنى كۆرسىتىدۇ. كۈلرەڭ خاتالىق بالداقلىرى ئەڭ تۆۋەن ۋە ئەڭ چوڭ AUC قىممىتىنى كۆرسىتىدۇ. نۇقتىلىق سىزىق 27 تاللانغان بىئوماركېر بىلەن ئەڭ ياخشى مودېلنى كۆرسىتىدۇ. AUC، قوبۇللىغۇچنىڭ خىزمەت خاراكتېرى (ROC) ئەگرى سىزىقى ئاستىدىكى رايون. c LA گۇرۇپپىسىدىكى 27 تاللانغان مېتابولىتنىڭ بايقاش گۇرۇپپىسىدىكى BN گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا قاتلىنىش ئۆزگىرىشى. قىزىل ئىستون - ئاكتىپلاشتۇرۇش. كۆك ئىستون تۆۋەنلەش. d–f بايقاش، ئىچكى ۋە تاشقى تەكشۈرۈش توپلىمىدىكى 27 مېتابولىت بىرىكمىسىگە ئاساسەن پەرقلەندۈرۈش مودېلىنىڭ كۈچىنى كۆرسىتىدىغان قوبۇللىغۇچنىڭ خىزمەت خاراكتېرى (ROC) ئەگرى سىزىقلىرى. مەنبە سانلىق مەلۇماتلىرى مەنبە سانلىق مەلۇمات ھۆججىتى شەكلىدە تەمىنلىنىدۇ.
بۇ 27 خىل مېتابولىتنىڭ ئېغىرلىق رېگرېسسىيە كوئېففىتسېنتى ئاساسىدا بىر پەرەز مودېلى قۇرۇلدى (قوشۇمچە جەدۋەل 3). بۇ 27 خىل مېتابولىتقا ئاساسەن ROC ئانالىزى ئەگرى سىزىق ئاستىدىكى رايون (AUC) قىممىتى 0.933، بايقاش گۇرۇپپىسىنىڭ سەزگۈرلۈكى 0.868، خاسلىق 0.859 ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى (2d-رەسىم). شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا، LA بىلەن HC ئوتتۇرىسىدىكى 38 ئىزاھاتلىق پەرقلىق مېتابولىت ئىچىدە، 16 خىل مېتابولىتتىن تەركىب تاپقان بىر يۈرۈش AUC 0.902 بولۇپ، سەزگۈرلۈكى 0.801، خاسلىق 0.856 بولغان (قوشۇمچە رەسىم 6a-c). پەرقلىق مېتابولىتلارنىڭ ھەر خىل قاتلىنىش ئۆزگىرىش چەكلىرىگە ئاساسەن AUC قىممەتلىرىمۇ سېلىشتۇرۇلدى. بىز تۈرگە ئايرىش مودېلىنىڭ قاتلىنىش ئۆزگىرىش دەرىجىسى 1.2 گە، 1.5 ياكى 2.0 گە تەڭشەلگەندە LA بىلەن BN (HC) نى پەرقلەندۈرۈشتە ئەڭ ياخشى ئۈنۈمگە ئېرىشكەنلىكىنى بايقىدۇق (قوشۇمچە رەسىم 7a، b). 27 خىل مېتابولىت گۇرۇپپىسىغا ئاساسلانغان تۈرگە ئايرىش مودېلى ئىچكى ۋە تاشقى گۇرۇپپىلاردا تېخىمۇ دەلىللەندى. ئىچكى دەلىللەش ئۈچۈن AUC 0.915 (سەزگۈرلۈك 0.867، خاسلىق 0.811)، تاشقى دەلىللەش ئۈچۈن 0.945 (سەزگۈرلۈك 0.810، خاسلىق 0.979) بولدى (2e، f-رەسىم). تەجرىبىخانا ئارا ئۈنۈمنى باھالاش ئۈچۈن، تاشقى گۇرۇپپىدىن 40 ئەۋرىشكە «ئۇسۇللار» بۆلىكىدە تەسۋىرلەنگەندەك تاشقى تەجرىبىخانىدا تەھلىل قىلىندى. تۈرگە ئايرىش توغرىلىقى 0.925 AUC غا يەتتى (قوشۇمچە رەسىم 8). ئۆپكە ياپراق ھۈجەيرە راكى (LUSC) ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىدىن (LUAD) كېيىنكى ئىككىنچى ئورۇندا تۇرىدىغان كىچىك ھۈجەيرىلىك بولمىغان ئۆپكە راكى (NSCLC) تۈرى بولغاچقا، بىز يەنە ماددا ئالمىشىش ئارخىپىنىڭ پايدىلىقلىقىنى تەكشۈردۇق. BN ۋە 16 LUSC ئەھۋالى. LUSC بىلەن BN ئوتتۇرىسىدىكى پەرقلەندۈرۈشنىڭ AUC قىممىتى 0.776 (قوشۇمچە رەسىم 9) بولۇپ، LUAD بىلەن BN ئوتتۇرىسىدىكى پەرقلەندۈرۈشكە سېلىشتۇرغاندا ئىقتىدارنىڭ ناچار ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، CT رەسىملىرىدىكى تۈگۈنلەرنىڭ چوڭ-كىچىكلىكى يامان سۈپەتلىك ئۆسمە ئېھتىماللىقى بىلەن مۇسبەت مۇناسىۋەتلىك بولۇپ، تۈگۈن داۋالاشنىڭ ئاساسلىق بەلگىلىگۈچىسى بولۇپ قالىدۇ25،26،27. NELSON تەكشۈرۈش تەتقىقاتىنىڭ چوڭ گۇرۇپپىسىدىكى سانلىق مەلۇماتلارنى تەھلىل قىلىش نەتىجىسىدە، تۈگۈنلىرى <5 مىللىمېتىر بولغان سىناق قىلىنغۇچىلاردا يامان سۈپەتلىك ئۆسمە خەۋپى ھەتتا تۈگۈنسىز سىناق قىلىنغۇچىلارنىڭكىدىنمۇ ئوخشاش ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى28. شۇڭا، دائىملىق CT كۆزىتىشنى تەلەپ قىلىدىغان ئەڭ كىچىك چوڭلۇق ئەنگىلىيە كۆكرەك جەمئىيىتى (BTS) نىڭ تەۋسىيەسىگە ئاساسەن 5 مىللىمېتىر، Fleischner جەمئىيىتىنىڭ تەۋسىيەسىگە ئاساسەن 6 مىللىمېتىر29. قانداقلا بولمىسۇن، 6 مىللىمېتىردىن چوڭ ۋە روشەن ياخشى سۈپەتلىك ئالاھىدىلىككە ئىگە بولمىغان، ئېنىقسىز ئۆپكە تۈگۈنلىرى (IPN) دەپ ئاتىلىدىغان تۈگۈنلەر كلىنىكىلىق ئەمەلىيەتتىكى باھالاش ۋە داۋالاشتا چوڭ خىرىس بولۇپ قالماقتا30،31. ئاندىن بىز بايقاش ۋە ئىچكى دەلىللەش گۇرۇپپىلىرىدىن توپلانغان ئەۋرىشكىلەرنى ئىشلىتىپ، تۈگۈن چوڭلۇقىنىڭ ماددا ئالمىشىش ئىمزاسىغا تەسىر كۆرسىتىدىغان-تەسىر قىلمايدىغانلىقىنى تەكشۈردۇق. 27 دەلىللەنگەن بىئو بەلگىگە دىققەت قىلىپ، ئالدى بىلەن HC ۋە BN 6 مىللىمېتىردىن تۆۋەن مېتابولوملارنىڭ PCA ئارخىپىنى سېلىشتۇردۇق. بىز HC ۋە BN نىڭ سانلىق مەلۇمات نۇقتىلىرىنىڭ كۆپىنچىسىنىڭ بىر-بىرىگە ماس كېلىدىغانلىقىنى بايقىدۇق، بۇ ئىككى گۇرۇپپىدىكى قان زەردابىدىكى مېتابولىت سەۋىيەسىنىڭ ئوخشاش ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (3a-رەسىم). ھەر خىل چوڭلۇقتىكى ئالاھىدىلىك خەرىتىسى BN ۋە LA دا ساقلىنىپ قالغان (3b-رەسىم، c)، ھالبۇكى 6-20 مىللىمېتىر دائىرىسىدە يامان سۈپەتلىك ۋە ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر ئارىسىدا پەرق كۆرۈلگەن (3d-رەسىم). بۇ گۇرۇپپىنىڭ AUC قىممىتى 0.927، خاسلىقى 0.868 ۋە 6 دىن 20 مىللىمېتىرغىچە بولغان تۈگۈنچىلەرنىڭ يامان سۈپەتلىكلىكىنى مۆلچەرلەشتىكى سەزگۈرلۈكى 0.820 بولغان (3e-رەسىم، f). نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، تۈرگە ئايرىغۇچ تۈگۈنچىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىگە قارىماي، دەسلەپكى يامان سۈپەتلىك ئۆزگىرىشتىن كېلىپ چىققان ماددا ئالمىشىش ئۆزگىرىشلىرىنى خاتىرىلىيەلەيدۇ.
ad 27 خىل مېتابولىتنىڭ ماددا ئالمىشىش تۈرگە ئايرىغۇچىسىغا ئاساسەن بەلگىلەنگەن گۇرۇپپىلار ئارىسىدىكى PCA پروفىللىرىنى سېلىشتۇرۇش. CC ۋە BN < 6 mm. b BN < 6 mm بىلەن BN 6–20 mm. LA 6–20 mm دا LA 20–30 mm غا سېلىشتۇرغاندا. g BN 6–20 mm ۋە LA 6–20 mm. GC, n = 174; BN < 6 mm, n = 153; BN 6–20 mm, n = 91; LA 6–20 mm, n = 89; LA 20–30 mm, n = 77. e 6–20 mm تۈگۈنچىلەر ئۈچۈن پەرقلەندۈرۈش مودېلىنىڭ ئىقتىدارىنى كۆرسىتىدىغان قوبۇللىغۇچنىڭ مەشغۇلات خاراكتېرى (ROC) ئەگرى سىزىقى. f ئېھتىماللىق قىممىتى 6–20 mm چوڭلۇقتىكى تۈگۈنچىلەر ئۈچۈن لوگىستىكا رېگرېسسىيە مودېلىغا ئاساسەن ھېسابلىنىدۇ. كۈلرەڭ نۇقتىلىق سىزىق ئەڭ ياخشى چەك قىممىتىنى (0.455) كۆرسىتىدۇ. يۇقىرىدىكى سانلار لوس ئانژېلېس ئۈچۈن مۆلچەرلەنگەن ئەھۋاللارنىڭ نىسبىتىنى كۆرسىتىدۇ. ئىككى تەرەپلىك ستۇدېنتنىڭ t سىنىقىنى ئىشلىتىڭ. PCA، ئاساسلىق تەركىب ئانالىزى. ئەگرى سىزىق ئاستىدىكى AUC كۆلىمى. مەنبە سانلىق مەلۇماتلىرى مەنبە سانلىق مەلۇمات ھۆججىتى شەكلىدە تەمىنلىنىدۇ.
تەكلىپ قىلىنغان يامان سۈپەتلىك ئۆسمە مۆلچەرلەش مودېلىنىڭ ئىقتىدارىنى كۆرسىتىش ئۈچۈن، ئۆپكە تۈگۈنىنىڭ چوڭلۇقى (7-9 مىللىمېتىر) ئوخشاش بولغان تۆت ئەۋرىشكە (44-61 ياش) تاللاندى (4a-رەسىم، b). دەسلەپكى تەكشۈرۈشتە، 1-ئەھۋال كالتسىيلىشىش بىلەن قاتتىق تۈگۈنچە سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى، بۇ ئالاھىدىلىك ياخشى سۈپەتلىك ئۆسمە بىلەن مۇناسىۋەتلىك، 2-ئەھۋال بولسا ئېنىق ياخشى سۈپەتلىك ئالامەتلەر يوق ئېنىقسىز قىسمەن قاتتىق تۈگۈنچە سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى. ئۈچ قېتىملىق كۆزىتىش كومپيۇتېر توموگرافىيەسى تەكشۈرۈشىدە، بۇ ئەھۋاللارنىڭ 4 يىل ئىچىدە مۇقىم ساقلانغانلىقى ۋە شۇڭا ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچە دەپ قارالغانلىقى كۆرسىتىلدى (4a-رەسىم). يۈرۈشلۈك كومپيۇتېر توموگرافىيە تەكشۈرۈشلىرىنىڭ كلىنىكىلىق باھالىشى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، نۆۋەتتىكى تۈرگە ئايرىش مودېلى بىلەن بىر قېتىملىق قان زەردابى مېتابولىت ئانالىزى بۇ ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرنى ئېھتىماللىق چەكلىمىسىگە ئاساسەن تېز ۋە توغرا ئېنىقلىدى (1-جەدۋەل). 3-ئەھۋالدىكى 4b-رەسىمدە كۆپىنچە يامان سۈپەتلىك ئۆسمە بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولغان، پلېۋرا چېكىنىش ئالامەتلىرى بار تۈگۈنچە كۆرسىتىلدى32. 4-ئەھۋال بولسا ياخشى سۈپەتلىك سەۋەبى يوق ئېنىقسىز قىسمەن قاتتىق تۈگۈنچە سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى. بۇ ئەھۋاللارنىڭ ھەممىسى تۈرگە ئايرىش مودېلىغا ئاساسەن خەتەرلىك دەپ مۆلچەرلەنگەن (1-جەدۋەل). ئۆپكە ئۆسمىسى راكىنىڭ باھالىنىشى ئۆپكە كېسىش ئوپېراتسىيەسىدىن كېيىنكى گىستوپاتولوگىيەلىك تەكشۈرۈش ئارقىلىق كۆرسىتىلدى (4b-رەسىم). تاشقى تەكشۈرۈش توپلىمى ئۈچۈن، ماددا ئالمىشىش تۈرگە ئايرىش 6 مىللىمېتىردىن چوڭ بولغان ئېنىقسىز ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ ئىككى ئەھۋالىنى توغرا مۆلچەرلىدى (قوشۇمچە رەسىم 10).
ئىككى خىل ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىنىڭ ئۆپكىسىنىڭ ئوق يۆنىلىشىدىكى كۆزنىكىنىڭ CT رەسىملىرى. 1-خىل ئەھۋالدا، 4 يىلدىن كېيىنكى CT تەكشۈرۈشىدە ئوڭ ئاستىنقى بۆرەكتە كالتسىيلىشىش بار 7 مىللىمېتىرلىق مۇقىم قاتتىق تۈگۈنچى كۆرسىتىلدى. 2-خىل ئەھۋالدا، 5 يىلدىن كېيىنكى CT تەكشۈرۈشىدە ئوڭ ئۈستۈنكى بۆرەكتە دىئامېتىرى 7 مىللىمېتىر بولغان مۇقىم، قىسمەن قاتتىق تۈگۈنچى بايقالدى. b ئۆپكە كېسىۋېتىشتىن بۇرۇنقى I باسقۇچلۇق ئادېنوكارسىنومانىڭ ئىككى مىسالىنىڭ ئوق يۆنىلىشىدىكى CT رەسىملىرى ۋە ئۇنىڭغا ماس كېلىدىغان پاتولوگىيىلىك تەتقىقاتلار. 3-خىل ئەھۋالدا ئوڭ ئۈستۈنكى بۆرەكتە دىئامېتىرى 8 مىللىمېتىر بولغان، پىلۋرا چېكىنىش بىلەن بىر تۈگۈنچى بايقالدى. 4-خىل ئەھۋالدا سول ئۈستۈنكى بۆرەكتە 9 مىللىمېتىرلىق قىسمەن قاتتىق يەر ئەينەك تۈگۈنچى بايقالدى. كېسىۋېتىلگەن ئۆپكە توقۇلمىسىنىڭ گېماتوكسىلىن ۋە ئېئوزىن (H&E) بوياش (مىقياسلىق بالداق = 50 μm) ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىنىڭ ئاسىنار ئۆسۈش ئەندىزىسىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. ئوقلار CT رەسىملىرىدە بايقالغان تۈگۈنچىنى كۆرسىتىدۇ. H&E رەسىملىرى پاتولوگ تەرىپىدىن تەكشۈرۈلگەن كۆپ خىل (>3) مىكروسكوپ مەيدانلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى.
بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى پەرقلەندۈرۈشتە قان زەردابى مېتابولىت بىئو بەلگىلىرىنىڭ يوشۇرۇن قىممىتىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ كومپيۇتېر توموگرافىيەسىنى تەكشۈرۈشتە قىيىنچىلىق تۇغدۇرۇشى مۇمكىن.
دەلىللەنگەن پەرقلىق مېتابولىتلار تاختىسىغا ئاساسەن، بىز ئاساسلىق ماددا ئالمىشىش ئۆزگىرىشلىرىنىڭ بىئولوگىيىلىك باغلىنىشىنى ئېنىقلاشقا تىرىشتۇق. MetaboAnalyst تەرىپىدىن ئېلىپ بېرىلغان KEGG يولىنى بايىتىش ئانالىزىدا، ئىككى بېرىلگەن گۇرۇپپا ئارىسىدا 6 ئورتاق، كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئۆزگەرگەن يول بايقالدى (LA بىلەن HC نىڭ پەرقى ۋە LA بىلەن BN نىڭ پەرقى، تەڭشەلگەن p ≤ 0.001، ئۈنۈم > 0.01). بۇ ئۆزگىرىشلەر پىرۇۋات مېتابولىزمى، تىرىپتوفان مېتابولىزمى، نىئاتسىن ۋە نىكوتىنامىت مېتابولىزمى، گلىكولىز، TCA دەۋرىيلىكى ۋە پۇرىن مېتابولىزمىدىكى قالايمىقانچىلىقلار بىلەن خاراكتېرلىنىدۇ (5a-رەسىم). ئاندىن بىز ئابسولۇت مىقدارلاشتۇرۇش ئارقىلىق ئاساسلىق ئۆزگىرىشلەرنى دەلىللەش ئۈچۈن نىشانلىق مېتابولىزمنى ئېلىپ باردۇق. ئەسلى مېتابولىت ئۆلچىمىنى ئىشلىتىپ، ئۈچ كۋادرۇپول ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (QQQ) ئارقىلىق ئورتاق ئۆزگەرگەن يوللاردىكى ئورتاق مېتابولىتلارنى ئېنىقلاش. مېتابولومىك تەتقىقات نىشان ئەۋرىشكىسىنىڭ نوپۇس ئالاھىدىلىكلىرى قوشۇمچە جەدۋەل 4 گە كىرگۈزۈلگەن. بىزنىڭ دۇنيا مىقياسىدىكى مېتابولومىك نەتىجىلىرىمىزگە ماس ھالدا، مىقدار ئانالىزى LA دا گىپوكسانتىن ۋە كىسانتىن، پىرۇۋات ۋە لاكتاتنىڭ BN ۋە HC غا سېلىشتۇرغاندا ئاشقانلىقىنى جەزملەشتۈردى (رەسىم 5b، c، p <0.05). قانداقلا بولمىسۇن، بۇ مېتابولىتلاردا BN بىلەن HC ئوتتۇرىسىدا مۇھىم پەرق بايقالمىغان.
LA گۇرۇپپىسىدىكى BN ۋە HC گۇرۇپپىلىرىغا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك پەرقلىنىدىغان مېتابولىتلارنىڭ KEGG يولىنى بايىتىش ئانالىزى. ئىككى تەرەپلىك دۇنياۋى سىناق قوللىنىلدى، ھەمدە Holm-Bonferroni ئۇسۇلى ئارقىلىق p قىممىتى تەڭشىلەندى (tەڭگەللەنگەن p ≤ 0.001 ۋە ئۈنۈم چوڭلۇقى > 0.01). b–d LC-MS/MS ئارقىلىق بېكىتىلگەن قان زەردابى HC، BN ۋە LA دىكى گىپوكسانتىن، كىسانتىن، لاكتات، پىرۇۋات ۋە تىرىپتوفان سەۋىيەسىنى كۆرسىتىدىغان ۋىئولىن جەدۋەللىرى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 70). ئاق ۋە قارا نۇقتىلىق سىزىقلار ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئوتتۇرا ۋە كۋارتىلنى كۆرسىتىدۇ. e ۋىئولىن جەدۋەللىرى LUAD-TCGA سانلىق مەلۇمات توپلىمىدىكى نورمال ئۆپكە توقۇلمىسىغا (n = 59) سېلىشتۇرغاندا ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىدىكى SLC7A5 ۋە QPRT نىڭ نورماللاشتۇرۇلغان Log2TPM (مىليونغا تەڭ ترانسكرىپت) mRNA ئىپادىسىنى (n = 513) كۆرسىتىدۇ. ئاق رامكا كۋارتلار ئارا دائىرىنى، ئوتتۇرىدىكى گورىزونتال قارا سىزىق ئوتتۇرا قىممەتنى، رامكىدىن سوزۇلغان تىك قارا سىزىق %95 ئىشەنچلىك ئارىلىقنى (CI) كۆرسىتىدۇ. f TCGA سانلىق مەلۇمات توپلىمىدىكى ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى (n = 513) ۋە نورمال ئۆپكە توقۇلمىسى (n = 59) دىكى SLC7A5 ۋە GAPDH ئىپادىسىنىڭ پېئارسون كوررېلياتسىيە گىرافىكى. كۈلرەڭ رايون %95 CI نى كۆرسىتىدۇ. r، پېئارسون كوررېلياتسىيە كوئېففىتسېنتى. g LC-MS/MS ئارقىلىق بېكىتىلگەن ئالاھىدە بولمىغان shRNA كونترول (NC) ۋە shSLC7A5 (Sh1, Sh2) بىلەن ترانسفېكسىيە قىلىنغان A549 ھۈجەيرىلىرىدىكى نورماللاشتۇرۇلغان ھۈجەيرە ترىپتوفان سەۋىيەسى. ھەر بىر گۇرۇپپىدىكى بەش بىئولوگىيىلىك مۇستەقىل ئەۋرىشكىنىڭ ستاتىستىكىلىق ئانالىزى كۆرسىتىلدى. h A549 ھۈجەيرىلىرى (NC) ۋە SLC7A5 نىڭ A549 ھۈجەيرىلىرىدىكى (Sh1, Sh2) NADt نىڭ ھۈجەيرە سەۋىيەسى (NAD+ ۋە NADH نى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئومۇمىي NAD). ھەر بىر گۇرۇپپىدىكى ئۈچ بىئولوگىيىلىك مۇستەقىل ئەۋرىشكىنىڭ ستاتىستىكىلىق ئانالىزى كۆرسىتىلدى. i SLC7A5 نىڭ چۈشۈرۈلۈشىدىن ئىلگىرى ۋە كېيىن A549 ھۈجەيرىلىرىنىڭ گلىكولىزلىق پائالىيىتى ھۈجەيرە سىرتىدىكى كىسلاتالىشىش سۈرئىتى (ECAR) ئارقىلىق ئۆلچەندى (n = ھەر بىر گۇرۇپپىدا 4 بىئولوگىيىلىك مۇستەقىل ئەۋرىشكە). 2-DG، 2-دېئوكسى-D-گلىكوزا. (b–h) دا ئىككى تەرەپلىك ستۇدېنتنىڭ t سىنىقى ئىشلىتىلدى. (g–i) دا، خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە قىممەت ± SD نى كۆرسىتىدۇ، ھەر بىر سىناق ئۈچ قېتىم مۇستەقىل ئېلىپ بېرىلدى ۋە نەتىجىلەر ئوخشاش بولدى. مەنبە سانلىق مەلۇماتلىرى مەنبە سانلىق مەلۇمات ھۆججىتى شەكلىدە تەمىنلەندى.
LA گۇرۇپپىسىدىكى تىرىپتوفان مېتابولىزمىنىڭ ئۆزگىرىشىنىڭ مۇھىم تەسىرىنى كۆزدە تۇتۇپ، بىز يەنە QQQ ئارقىلىق HC، BN ۋە LA گۇرۇپپىلىرىدىكى قان زەردابىدىكى تىرىپتوفان سەۋىيەسىنى باھالىدۇق. بىز LA دا قان زەردابىدىكى تىرىپتوفاننىڭ HC ياكى BN غا سېلىشتۇرغاندا تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق (p < 0.001، 5d-رەسىم)، بۇ ئىلگىرىكى بايقاشلار بىلەن ماس كېلىدۇ، يەنى ئۆپكە راكى بىمارلىرىدا قان ئايلىنىۋاتقان تىرىپتوفان سەۋىيەسى كونترول گۇرۇپپىسىدىكى ساغلام كونترول گۇرۇپپىسىدىكىلەرگە قارىغاندا تۆۋەنرەك33،34،35. PET/CT ئىز قوغلىغۇچ 11C-مېتىل-L-تىرىپتوفان ئىشلىتىلگەن يەنە بىر تەتقىقاتتا ئۆپكە راكى توقۇلمىلىرىدىكى تىرىپتوفان سىگنالىنى ساقلاش ۋاقتىنىڭ ياخشى سۈپەتلىك يارىلار ياكى نورمال توقۇلمىلارغا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقانلىقى بايقالغان36. بىز LA قان زەردابىدىكى تىرىپتوفاننىڭ ئازىيىشى ئۆپكە راكى ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئاكتىپ تىرىپتوفاننى سۈمۈرۈشىنى ئەكىس ئەتتۈرۈشى مۇمكىن دەپ پەرەز قىلىمىز.
شۇنداقلا، تىرىپتوفان كاتابولىزمىنىڭ كىنۇرېنىن يولىنىڭ ئاخىرقى مەھسۇلاتى NAD+37،38 ئىكەنلىكى مەلۇم، بۇ گلىسېرالدېھىد-3-فوسفاتنىڭ گلىكولىزدا 1،3-بىسفوسفوگلىتسېرات بىلەن بولغان رېئاكسىيەسىنىڭ مۇھىم سۇبستراتى. ئىلگىرىكى تەتقىقاتلار تىرىپتوفان كاتابولىزمىنىڭ ئىممۇنىتېت تەڭشىشىدىكى رولىغا مەركەزلەشكەن بولسىمۇ، بىز بۇ تەتقىقاتتا كۆزىتىلگەن تىرىپتوفاننىڭ تەڭشىلىشىنىڭ قالايمىقانلىشىشى بىلەن گلىكولىز يوللىرى ئوتتۇرىسىدىكى ئۆز-ئارا تەسىرنى ئېنىقلاشقا تىرىشتۇق. ئېرىتكۈچى توشۇغۇچى ئائىلىسى 7 ئەزا 5 (SLC7A5) نىڭ تىرىپتوفان توشۇغۇچى ئىكەنلىكى مەلۇم43،44،45. كىنولىن كىسلاتاسى فوسفورىبوسىلترانسفېرازا (QPRT) كىنولىن كىسلاتاسىنى NAMN46 غا ئايلاندۇرىدىغان كىنۇرېنىن يولىنىڭ تۆۋەنكى ئېقىندىكى بىر خىل ئېنزىم. LUAD TCGA سانلىق مەلۇمات توپلىمىنى تەكشۈرۈشتە، SLC7A5 ۋە QPRT نىڭ نورمال توقۇلمىلارغا سېلىشتۇرغاندا ئۆسمە توقۇلمىلىرىدا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرىلىغانلىقى بايقالدى (5e-رەسىم). بۇ ئېشىش ئۆپكە ئۆسمىسىنىڭ I ۋە II باسقۇچلىرى، شۇنداقلا III ۋە IV باسقۇچلىرىدا كۆزىتىلدى (قوشۇمچە رەسىم 11)، بۇ راك پەيدا بولۇش بىلەن مۇناسىۋەتلىك تىرىپتوفان مېتابولىزمىنىڭ دەسلەپكى قالايمىقانلىشىشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بۇنىڭدىن باشقا، LUAD-TCGA سانلىق مەلۇمات توپلىمى راك بىمارلىرى ئەۋرىشكىسىدىكى SLC7A5 بىلەن GAPDH mRNA ئىپادىسى ئوتتۇرىسىدا ئاكتىپ مۇناسىۋەت بارلىقىنى كۆرسەتتى (r = 0.45, p = 1.55E-26, 5f-رەسىم). ئەكسىچە، نورمال ئۆپكە توقۇلمىلىرىدىكى بۇ خىل گېن ئىمزالىرى ئوتتۇرىسىدا مۇھىم مۇناسىۋەت بايقالمىغان (r = 0.25, p = 0.06, 5f-رەسىم). A549 ھۈجەيرىلىرىدىكى SLC7A5 نىڭ (قوشۇمچە رەسىم 12) نى يوقىتىش ھۈجەيرە تىرىپتوفان ۋە NAD(H) سەۋىيىسىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىپ، ھۈجەيرە سىرتىدىكى كىسلاتالىشىش سۈرئىتى (ECAR) ئارقىلىق ئۆلچەنگەندەك گلىكولىز پائالىيىتىنىڭ ئاجىزلىشىشىغا سەۋەب بولغان (1-رەسىم). 5i). شۇڭا، قان زەردابىدىكى ماددا ئالمىشىش ئۆزگىرىشى ۋە سىناق نەيچىسىدە بايقاشقا ئاساسەن، بىز تىرىپتوفان ئالمىشىشىنىڭ كىنۇرېنىن يولى ئارقىلىق NAD+ ھاسىل قىلىشى ۋە ئۆپكە راكىدا گلىكولىزنى ئىلگىرى سۈرۈشتە مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى پەرەز قىلىمىز.
تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، LDCT ئارقىلىق بايقالغان نۇرغۇن ئېنىقسىز ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى، PET-CT، ئۆپكە بىئوپسىيەسى ۋە يامان سۈپەتلىك ئۆسمە دىئاگنوزى قويۇلغانلىقى ئۈچۈن ئارتۇقچە داۋالاش قاتارلىق قوشۇمچە تەكشۈرۈشلەرنى ئېلىپ بېرىشقا توغرا كېلىشى مۇمكىن.31 6-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز CT ئارقىلىق بايقالغان ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ خەۋپ-خەتەر دەرىجىسىنى بېكىتىش ۋە كېيىنكى داۋالاشنى ياخشىلىشى مۇمكىن بولغان دىئاگنوز قويۇش قىممىتىگە ئىگە بىر قىسىم قان زەردابى مېتابولىتلىرىنى بايقىدى.
ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى تۆۋەن مىقداردىكى كومپيۇتېر توموگرافىيەسى (LDCT) ئارقىلىق باھالىنىدۇ، رەسىمگە ئېلىش ئالاھىدىلىكلىرى ياخشى ياكى يامان سۈپەتلىك سەۋەبلەرنى كۆرسىتىدۇ. تۈگۈنچىلەرنىڭ ئېنىقسىز نەتىجىسى دائىملىق تەكشۈرۈشكە، كېرەكسىز ئارىلىشىشقا ۋە ئارتۇقچە داۋالاشقا سەۋەب بولۇشى مۇمكىن. دىئاگنوز قويۇش قىممىتىگە ئىگە قان زەردابى ماددا ئالمىشىش تۈرگە ئايرىغۇچلىرىنى قوشۇش ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ خەۋپ-خەتىرىنى باھالاش ۋە كېيىنكى داۋالاشنى ياخشىلىشى مۇمكىن. PET پوزىترون ئېمىسسىيە توموگرافىيەسى.
ئامېرىكا NLST تەتقىقاتى ۋە ياۋروپا NELSON تەتقىقاتىدىكى سانلىق مەلۇماتلار شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، تۆۋەن مىقداردىكى كومپيۇتېر توموگرافىيەسى (LDCT) ئارقىلىق يۇقىرى خەۋپلىك گۇرۇپپىلارنى تەكشۈرۈش ئۆپكە راكى ئۆلۈش نىسبىتىنى تۆۋەنلىتىشى مۇمكىن1،3. قانداقلا بولمىسۇن، LDCT ئارقىلىق بايقالغان كۆپ ساندىكى تاسادىپىي ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ خەۋپ-خەتىرىنى باھالاش ۋە كېيىنكى كلىنىكىلىق داۋالاش ئەڭ قىيىن مەسىلە بولۇپ قالدى. ئاساسلىق مەقسەت ئىشەنچلىك بىئو بەلگىلەرنى بىرلەشتۈرۈش ئارقىلىق مەۋجۇت LDCT ئاساسلىق كېلىشىملەرنى توغرا تۈرگە ئايرىشنى ئەلالاشتۇرۇشتىن ئىبارەت.
قان مېتابولىتلىرى قاتارلىق بەزى مولېكۇلا بىئولوگىيىلىك بەلگىلىرى ئۆپكە راكىنى ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرۇش ئارقىلىق ئېنىقلاندى15،17. بۇ تەتقىقاتتا، بىز LDCT ئارقىلىق تاسادىپىي بايقالغان ياخشى ۋە يامان سۈپەتلىك ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن قان زەردابى مېتابولومىك ئانالىزىنى قوللىنىشقا دىققەت قىلدۇق. بىز UPLC-HRMS ئانالىزى ئارقىلىق ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى (HC)، ياخشى ئۆپكە تۈگۈنچىلىرى (BN) ۋە I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنوما (LA) ئەۋرىشكىلىرىنىڭ دۇنياۋى قان زەردابى مېتابولومىنى سېلىشتۇردۇق. بىز HC ۋە BN نىڭ مېتابولىزم ئارخىپى ئوخشاش ئىكەنلىكىنى، LA نىڭ بولسا HC ۋە BN غا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك ئۆزگىرىشلەرنى كۆرسەتكەنلىكىنى بايقىدۇق. بىز LA نى HC ۋە BN دىن پەرقلەندۈرىدىغان ئىككى يۈرۈش قان زەردابى مېتابولىتلىرىنى بايقىدۇق.
ھازىرقى LDCT غا ئاساسلانغان ياخشى ۋە يامان سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرنى ئېنىقلاش لايىھىسى ئاساسلىقى تۈگۈنچىلەرنىڭ چوڭ-كىچىكلىكى، زىچلىقى، شەكلى ۋە ۋاقىتنىڭ ئۆتۈشىگە ئەگىشىپ ئۆسۈش سۈرئىتىگە ئاساسلىنىدۇ30. ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا تۈگۈنچىلەرنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنىڭ ئۆپكە راكىغا گىرىپتار بولۇش ئېھتىماللىقى بىلەن زىچ مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى كۆرسىتىلگەن. ھەتتا يۇقىرى خەۋپلىك بىمارلاردىمۇ، <6 مىللىمېتىرلىق تۈگۈنلەردە يامان سۈپەتلىك ئۆسمە خەۋپى %1 تىن تۆۋەن. 6 دىن 20 مىللىمېتىرغىچە بولغان تۈگۈنچىلەردە يامان سۈپەتلىك ئۆسمە خەۋپى %8 تىن %64 كىچە بولىدۇ30. شۇڭا، Fleischner جەمئىيىتى دائىملىق CT كۆزىتىش ئۈچۈن دىئامېتىرى 6 مىللىمېتىر بولۇشىنى تەۋسىيە قىلىدۇ.29 قانداقلا بولمىسۇن، 6 مىللىمېتىردىن چوڭ بولغان ئېنىقسىز ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ (IPN) خەۋپ-خەتىرىنى باھالاش ۋە باشقۇرۇش يېتەرلىك ئېلىپ بېرىلمىغان31. تۇغما يۈرەك كېسىلىنى ھازىرقى داۋالاش ئادەتتە دائىم CT كۆزىتىش ئارقىلىق كۆزىتىشكە ئاساسلىنىدۇ.
جەزملەشتۈرۈلگەن مېتابولومغا ئاساسەن، بىز تۇنجى قېتىم ساغلام كىشىلەر بىلەن <6 مىللىمېتىرلىق ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەر ئوتتۇرىسىدىكى ماددا ئالمىشىش ئىمزالىرىنىڭ قاپلىنىشىنى نامايان قىلدۇق. بىئولوگىيىلىك ئوخشاشلىق ئىلگىرىكى CT بايقاشلىرى بىلەن ماس كېلىدۇ، يەنى <6 مىللىمېتىرلىق تۈگۈنچىلەرنىڭ يامان سۈپەتلىك ئۆسمە خەۋپى تۈگۈنسىز سىناق قىلىنغۇچىلارغا قارىغاندا تۆۋەن.30 شۇنى ئەسكەرتىش كېرەككى، بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز يەنە <6 مىللىمېتىر ۋە ≥6 مىللىمېتىرلىق ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرنىڭ ماددا ئالمىشىش ئارخىپىدا يۇقىرى ئوخشاشلىققا ئىگە ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ ياخشى سۈپەتلىك سەۋەبنىڭ فۇنكسىيەلىك ئېنىقلىمىسىنىڭ تۈگۈنچىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىدىن قەتئىينەزەر ئىزچىل ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. شۇڭا، زامانىۋى دىئاگنوز قويۇش قان زەردابى مېتابولىت تاختىلىرى تۈگۈنچىلەر دەسلەپتە CT دا بايقالغاندا، بىر قېتىملىق تەكشۈرۈشنى چەتكە قېقىش سىنىقى سۈپىتىدە تەمىنلىشى ۋە يۈرۈشلۈك كۆزىتىشنى ئازايتىشى مۇمكىن. شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا، ئوخشاش ماددا ئالمىشىش بىئو بەلگىلىرى تاختىسى چوڭلۇقى ≥6 مىللىمېتىرلىق يامان سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرنى ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەردىن پەرقلەندۈرۈپ، ئوخشاش چوڭلۇقتىكى IPN ۋە CT رەسىملىرىدە ئېنىقسىز مورفولوگىيەلىك ئالاھىدىلىكلەرنى توغرا مۆلچەرلىدى. بۇ قان زەردابى مېتابولىزم تۈرگە ئايرىغۇچ ≥6 مىللىمېتىرلىق تۈگۈنچىلەرنىڭ يامان سۈپەتلىك ئۆسمىسىنى مۆلچەرلەشتە ياخشى نەتىجە ياراتتى، AUC قىممىتى 0.927 بولدى. بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، ئۆزگىچە قان زەردابى مېتابولىزمى ئىمزالىرى راكنىڭ دەسلەپكى مەزگىلدىكى ماددا ئالمىشىش ئۆزگىرىشلىرىنى ئالاھىدە ئەكس ئەتتۈرۈپ بېرىشى مۇمكىن ھەمدە تۈگۈننىڭ چوڭ-كىچىكلىكىگە قارىماي، خەتەرنى مۆلچەرلەيدىغان ئامىل سۈپىتىدە قىممەتكە ئىگە.
دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى (LUAD) ۋە ياپىلاق ھۈجەيرە راكى (LUSC) كىچىك ھۈجەيرىلىك بولمىغان ئۆپكە راكىنىڭ (NSCLC) ئاساسلىق تۈرلىرى. LUSC تاماكا چېكىش بىلەن زىچ مۇناسىۋەتلىك 47 ۋە LUAD CT تەكشۈرۈشىدە بايقالغان تاسادىپىي ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان گىستولوگىيەسى ئىكەنلىكىنى نەزەرگە ئالغاندا 48، بىزنىڭ تۈرگە ئايرىش مودېلىمىز I باسقۇچلۇق ئادېنوكارسىنوما ئەۋرىشكىلىرى ئۈچۈن مەخسۇس ياسالغان. ۋاڭ ۋە خىزمەتداشلىرى يەنە LUAD غا دىققەت قىلىپ، دەسلەپكى باسقۇچلۇق ئۆپكە راكىنى ساغلام كىشىلەردىن پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن لىپىدومىك ئۇسۇل ئارقىلىق توققۇز لىپىد بەلگىسىنى بايقىدۇق 17. بىز نۆۋەتتىكى تۈرگە ئايرىش مودېلىنى I باسقۇچلۇق LUSC نىڭ 16 مىسالى ۋە 74 ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىدە سىناق قىلدۇق ۋە LUSC نىڭ مۆلچەرلەش توغرىلىقىنىڭ تۆۋەنلىكىنى (AUC 0.776) كۆزەتتۇق، بۇ LUAD ۋە LUSC نىڭ ئۆزىگە خاس ماددا ئالمىشىش بەلگىسى بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. ھەقىقەتەن، LUAD ۋە LUSC نىڭ سەۋەبى، بىئولوگىيىلىك كېلىپ چىقىشى ۋە گېن ئۆزگىرىشى جەھەتتە پەرقلىنىدىغانلىقى ئىسپاتلاندى 49. شۇڭا، تەكشۈرۈش پروگراممىلىرىدا نوپۇسقا ئاساسەن ئۆپكە راكىنى بايقاش ئۈچۈن مەشىق مودېللىرىغا باشقا تىپتىكى گىستولوگىيەلەرنى كىرگۈزۈش كېرەك.
بۇ يەردە، بىز ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى ۋە ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرگە سېلىشتۇرغاندا، ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىدا ئەڭ كۆپ ئۆزگەرگەن ئالتە يولنى بايقىدۇق. كسانتىن ۋە گىپوكسانتىن پۇرىن مېتابولىزم يولىنىڭ ئورتاق مېتابولىتلىرى. بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىزگە ماس ھالدا، ساغلام كونترول گۇرۇپپىسى ياكى ئىنۋازىيەدىن بۇرۇنقى باسقۇچتىكى بىمارلارغا سېلىشتۇرغاندا، ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى بىمارلىرىنىڭ قان زەردابى ياكى توقۇلمىلىرىدا پۇرىن مېتابولىزمى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئارىلىق ماددىلار كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقان. قان زەردابىدىكى كسانتىن ۋە گىپوكسانتىن سەۋىيەسىنىڭ يۇقىرىلىشى تېز سۈرئەتتە كۆپىيىۋاتقان راك ھۈجەيرىلىرى تەلەپ قىلىدىغان ئانابولىزمنى ئەكىس ئەتتۈرۈشى مۇمكىن. گىليۇكوزا مېتابولىزمىنىڭ قالايمىقانلىشىشى راك مېتابولىزمىنىڭ داڭلىق بەلگىسى51. بۇ يەردە، بىز HC ۋە BN گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا، LA گۇرۇپپىسىدا پىرۇۋات ۋە لاكتاتنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقانلىقىنى كۆزەتتۇق، بۇ ئىلگىرىكى كىچىك ھۈجەيرىلىك بولمىغان ئۆپكە راكى (NSCLC) بىمارلىرى ۋە ساغلام كونترول گۇرۇپپىسىنىڭ قان زەردابى مېتابولوم پروفىلىدا گلىكولىز يولى نورمالسىزلىقى توغرىسىدىكى دوكلاتلار بىلەن ماس كېلىدۇ. نەتىجىلەر بىردەك52،53.
مۇھىمى، بىز ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىنىڭ قان زەردابىدىكى پىرۇۋات بىلەن تىرىپتوفاننىڭ ئالمىشىشى ئوتتۇرىسىدا تەتۈر مۇناسىۋەتنى كۆزەتتۇق. LA گۇرۇپپىسىدا قان زەردابىدىكى تىرىپتوفاننىڭ مىقدارى HC ياكى BN گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا تۆۋەنلىگەن. قىزىقارلىقى شۇكى، ئىلگىرى ئالدىن پىلانلانغان بىر گۇرۇپپا ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلغان بىر چوڭ كۆلەملىك تەتقىقاتتا قان ئايلىنىۋاتقان تىرىپتوفاننىڭ تۆۋەن مىقدارى ئۆپكە راكىنىڭ خەۋپ-خەتىرىنىڭ ئېشىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى بايقالغان 54. تىرىپتوفان بىز پۈتۈنلەي يېمەكلىكتىن ئالىدىغان مۇھىم ئامىنو كىسلاتا. بىز ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىدا قان زەردابىدىكى تىرىپتوفاننىڭ ئازىيىشى بۇ مېتابولىتنىڭ تېز ئازىيىشىنى ئەكىس ئەتتۈرۈشى مۇمكىن دەپ خۇلاسە چىقاردۇق. كىنۇرېنىن يولى ئارقىلىق تىرىپتوفاننىڭ كاتابولىزمىنىڭ ئاخىرقى مەھسۇلاتىنىڭ يېڭى NAD+ سىنتېزىنىڭ مەنبەسى ئىكەنلىكى مەلۇم. NAD+ ئاساسلىقى قۇتقۇزۇش يولى ئارقىلىق ئىشلەپچىقىرىلغاچقا، NAD+ نىڭ ساغلاملىق ۋە كېسەللىكتىكى تىرىپتوفان ئالمىشىشىدىكى مۇھىملىقى تېخى ئېنىقلانمىغان46. TCGA سانلىق مەلۇمات ئامبىرىنى تەھلىل قىلىشىمىز شۇنى كۆرسەتتىكى، تىرىپتوفان توشۇغۇچى ئېرىتمە توشۇغۇچى 7A5 (SLC7A5) نىڭ ئىپادىلىنىشى نورمال كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىدا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقان ۋە گلىكولىز ئېنزىم GAPDH نىڭ ئىپادىلىنىشى بىلەن ئاكتىپ مۇناسىۋەتلىك. ئىلگىرىكى تەتقىقاتلار ئاساسلىقى تىرىپتوفان كاتابولىزمىنىڭ راكقا قارشى ئىممۇنىتېت ئىنكاسىنى باستۇرۇشتىكى رولىغا مەركەزلەشكەن40،41،42. بۇ يەردە بىز ئۆپكە راكى ھۈجەيرىلىرىدە SLC7A5 نى چۈشۈرۈش ئارقىلىق تىرىپتوفاننىڭ سۈمۈرۈلۈشىنى توسۇشنىڭ ھۈجەيرە NAD سەۋىيەسىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا گلىكولىز پائالىيىتىنىڭ ئاجىزلىشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىمىز. قىسقىسى، بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسىنىڭ يامان سۈپەتلىك ئۆزگىرىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك قان زەردابىدىكى ماددا ئالمىشىش ئۆزگىرىشىنىڭ بىئولوگىيىلىك ئاساسىنى تەمىنلەيدۇ.
EGFR مۇتاتسىيەسى NSCLC بىمارلىرىدا ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان قوزغاتقۇچ مۇتاتسىيە. بىزنىڭ تەتقىقاتىمىزدا، EGFR مۇتاتسىيەسى (n = 41) بولغان بىمارلارنىڭ ئومۇمىي ماددا ئالمىشىش ئارخىپى ياۋا تىپتىكى EGFR (n = 31) بىمارلىرىغا ئوخشاش ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق، گەرچە بىز ئاتسىلكارنىتىن بىمارلىرىدا بەزى EGFR مۇتانىت بىمارلىرىنىڭ قان زەردابى سەۋىيەسىنىڭ تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق. ئاتسىلكارنىتىنلارنىڭ بېكىتىلگەن رولى ئاتسىل گۇرۇپپىلىرىنى سىتوپلازمىدىن مىتوخوندىرىيە ماترىتسىسىغا يۆتكەش بولۇپ، بۇ ياغ كىسلاتالىرىنىڭ ئوكسىدلىنىشىغا سەۋەب بولۇپ، ئېنېرگىيە ھاسىل قىلىدۇ 55. بىزنىڭ تەتقىقاتىمىزغا ماس ھالدا، يېقىندا ئېلىپ بېرىلغان بىر تەتقىقاتتا 102 ئۆپكە ئادېنوكارسىنوما توقۇلمىسى ئەۋرىشكىسىنىڭ ئومۇمىي ماددا ئالمىشىش ئارخىپى تەھلىل قىلىنىپ، EGFR مۇتانىت بىلەن EGFR ياۋا تىپتىكى ئۆسمىلەر ئوتتۇرىسىدىكى ئوخشاش ماددا ئالمىشىش ئارخىپى بايقالغان50. قىزىقارلىقى شۇكى، ئاتسىلكارنىتىن مىقدارى EGFR مۇتانىت گۇرۇپپىسىدىمۇ بايقالغان. شۇڭا، ئاتسىلكارنىتىن سەۋىيەسىدىكى ئۆزگىرىشلەر EGFR كەلتۈرۈپ چىقارغان ماددا ئالمىشىش ئۆزگىرىشلىرى ۋە ئاساسىي مولېكۇلا يوللىرىنى ئەكس ئەتتۈرىدىغان-ئەكىس ئەتتۈرمەيدىغانلىقى تېخىمۇ چوڭقۇر تەتقىق قىلىشقا ئەرزىيدۇ.
خۇلاسە قىلىپ ئېيتقاندا، بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز ئۆپكە تۈگۈنچىلىرىنىڭ دىففېرېنسىئال دىئاگنوزى ئۈچۈن قان زەردابى ماددا ئالمىشىش دەرىجىسىنى تۈرگە ئايرىش ئۇسۇلىنى بېكىتتى ھەمدە CT تەكشۈرۈش ئاساسىدا خەتەرنى باھالاشنى ئەلالاشتۇرالايدىغان ۋە كلىنىكىلىق داۋالاشنى ئاسانلاشتۇرالايدىغان خىزمەت ئېقىمىنى ئوتتۇرىغا قويدى.
بۇ تەتقىقات سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك دوختۇرخانىسىنىڭ ئەخلاق كومىتېتى، سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتىنىڭ تۇنجى تارماق دوختۇرخانىسى ۋە جېڭجۇ ئۇنىۋېرسىتېتى راك دوختۇرخانىسىنىڭ ئەخلاق كومىتېتى تەرىپىدىن تەستىقلانغان. بايقاش ۋە ئىچكى دەلىللەش گۇرۇپپىلىرىدا، سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك مەركىزى راكنى كونترول قىلىش ۋە ئالدىنى ئېلىش بۆلۈمىدە يىللىق داۋالاش تەكشۈرتۈشىدىن ئۆتۈۋاتقان كىشىلەردىن ساغلام كىشىلەردىن 174 قان زەردابى ۋە ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەردىن 244 قان زەردابى ۋە سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك مەركىزىدىن 166 ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىدىن توپلانغان. I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىسى سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك مەركىزىدىن توپلانغان. تاشقى دەلىللەش گۇرۇپپىسىدا، سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتىنىڭ بىرىنچى تارماق دوختۇرخانىسىدىن ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىنىڭ 48 ئەھۋالى، I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىنىڭ 39 ئەھۋالى ۋە جېڭجۇ راك دوختۇرخانىسىدىن I باسقۇچلۇق ئۆپكە ئادېنوكارسىنومىنىڭ 24 ئەھۋالى بار ئىدى. سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك مەركىزى يەنە بېكىتىلگەن ماددا ئالمىشىش تۈرگە ئايرىغۇچنىڭ دىئاگنوز قويۇش ئىقتىدارىنى سىناق قىلىش ئۈچۈن I باسقۇچلۇق ياپىلاق ھۈجەيرە ئۆپكە راكىنىڭ 16 مىسالىنى توپلىدى (بىمارلارنىڭ ئالاھىدىلىكلىرى قوشۇمچە جەدۋەل 5 دە كۆرسىتىلدى). بايقاش گۇرۇپپىسى ۋە ئىچكى دەلىللەش گۇرۇپپىسىدىن ئەۋرىشكىلەر 2018-يىلى يانۋاردىن 2020-يىلى مايغىچە توپلاندى. سىرتقى دەلىللەش گۇرۇپپىسى ئۈچۈن ئەۋرىشكىلەر 2021-يىلى ئاۋغۇستتىن 2022-يىلى ئۆكتەبىرگىچە توپلاندى. جىنىس جەھەتتىكى پەرقنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈش ئۈچۈن، ھەر بىر گۇرۇپپىغا تەخمىنەن تەڭ ساندا ئەر-ئايال كېسەللىكلىرى تەقسىم قىلىندى. بايقاش گۇرۇپپىسى ۋە ئىچكى تەكشۈرۈش گۇرۇپپىسى. قاتناشقۇچىنىڭ جىنسى ئۆزىنىڭ دوكلاتىغا ئاساسەن بېكىتىلدى. بارلىق قاتناشقۇچىلاردىن ئۇچۇرلۇق قوشۇلۇش ئېلىندى ۋە ھېچقانداق تۆلەم بېرىلمىدى. ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچىلەرگە گىرىپتار بولغانلار ئانالىز قىلىنغان ۋاقىتتا 2 يىلدىن 5 يىلغىچە بولغان مەزگىلدە CT سىكانىرلاش نەتىجىسى مۇقىم بولغانلار ئىدى، پەقەت سىرتقى دەلىللەش ئەۋرىشكىسىدىن 1 مىساللا ئوپېراتسىيەدىن بۇرۇن توپلانغان ۋە گىستوپاتولوگىيە ئارقىلىق دىئاگنوز قويۇلغان. سۇرۇنكا برونخىتتىن باشقا. ئۆپكە ئادېنوكارسىنوما كېسەللىكلىرى ئۆپكە ئېلىۋېتىشتىن بۇرۇن توپلاندى ۋە پاتولوگىيىلىك دىئاگنوز ئارقىلىق جەزملەشتۈرۈلدى. ئاچ قورساق قان ئەۋرىشكىلىرى قان زەردابىنى ئايرىش نەيچىسىدە ھېچقانداق قان تومۇرغا قارشى تۇرغۇچىسىز توپلاندى. قان ئەۋرىشكىلىرى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 1 سائەت ئۇيۇشتۇرۇلۇپ، ئاندىن قان زەردابى ئۈستىدىكى سۇيۇقلۇقنى يىغىش ئۈچۈن 2851 × g دا 4 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. قان زەردابىدىكى سۇيۇقلۇقلار مېتابولىت چىقىرىۋېلىنغۇچە -80 سېلسىيە گرادۇستا توڭلىتىلدى. سۇن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتى راك كېسەللىكلىرى مەركىزىنىڭ راكنىڭ ئالدىنى ئېلىش ۋە داۋالاش تەكشۈرۈش بۆلۈمى 40 ياشتىن 55 ياشقىچە بولغان ئەرلەر ۋە ئاياللارنى ئۆز ئىچىگە ئالغان 100 ساغلام ئىئانە قىلغۇچىدىن سۇيۇقلۇق توپلىدى. ھەر بىر ئىئانە قىلغۇچى ئەۋرىشكىسىنىڭ تەڭ مىقدارى ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ھاسىل بولغان سۇيۇقلۇق ئايرىم-ئايرىم ھالدا -80 سېلسىيە گرادۇستا ساقلاندى. سۇيۇقلۇق ئارىلاشمىسى سۈپەت كونترول قىلىش ۋە سانلىق مەلۇماتلارنى ئۆلچەملەشتۈرۈش ئۈچۈن پايدىلىنىش ماتېرىيالى سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى.
پايدىلىنىش قان زەردابى ۋە سىناق ئەۋرىشكىلىرى ئېرىتىلىپ، مېتابولىتلار بىرلەشتۈرۈلگەن ئېكىستراكسىيە ئۇسۇلى (MTBE/مېتانول/سۇ) ئارقىلىق ئېكىستراكسىيە قىلىندى 56. قىسقىسى، 50 μl قان زەردابى 225 μl مۇزدەك مېتانول ۋە 750 μl مۇزدەك مېتىل ترېت-بۇتىل ئېفىر (MTBE) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلدى. ئارىلاشمىنى ئارىلاشتۇرۇپ، مۇز ئۈستىدە 1 سائەت تۇرغۇزۇلدى. ئاندىن ئەۋرىشكىلەر ئارىلاشتۇرۇلۇپ، كامبرىج ئىزوتوپ تەجرىبىخانىسىدىن سېتىۋېلىنغان ئىچكى ئۆلچەملەر (13C-لاكتات، 13C3-پىرۇۋات، 13C-مېتىئونىن ۋە 13C6-ئىزولېئۇسىن) بار 188 μl MS دەرىجىلىك سۇ بىلەن ئارىلاشتۇرۇلدى. ئاندىن ئارىلاشما 15000 × g دا 4 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى، تۆۋەنكى باسقۇچ ئىجابىي ۋە مەنپىي ھالەتتە LC-MS ئانالىزى ئۈچۈن ئىككى تۇرۇبا (ھەر بىرى 125 μL) غا يۆتكەلدى. ئاخىرىدا، ئەۋرىشكە يۇقىرى سۈرئەتلىك ۋاكۇئۇم قويۇقلاشتۇرۇش ماشىنىسىدا قۇرغاق ھالغا كەلتۈرۈلدى.
قۇرۇتۇلغان مېتابولىتلار 120 μl 80% ئاتسېتونىترىلدا قايتا ھاسىل قىلىندى، 5 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلدى ۋە 4°C دا 10 مىنۇت 15000 × g دا مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق مېتابولومىك تەتقىقاتى ئۈچۈن مىكرو قىستۇرمىلار بىلەن سېرىق رەڭلىك ئەينەك بوتۇلكىلارغا يۆتكەلدى. ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (UPLC-HRMS) سۇپىسىدا نىشانسىز مېتابولومىك ئانالىزى قىلىندى. مېتابولىتلار Dionex Ultimate 3000 UPLC سىستېمىسى ۋە ACQUITY BEH ئامىد تۈۋرۈكى (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, Waters) ئارقىلىق ئايرىلدى. مۇسبەت ئىئون ھالىتىدە، ھەرىكەتچان باسقۇچلار %95 (A) ۋە %50 ئاتسېتونىترىل (B) بولۇپ، ھەر بىرى 10 mmol/L ئاممونىي ئاتسېتات ۋە %0.1 فورمىك كىسلاتانى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. مەنپىي ھالەتتە، A ۋە B ھەرىكەتچان باسقۇچلىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %95 ۋە %50 ئاتسېتونىترىلنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ، ھەر ئىككى باسقۇچتا 10 مىللىمول/لىتىر ئاممونىي ئاتسېتات بار، pH قىممىتى = 9. گرادىيېنت پروگراممىسى تۆۋەندىكىدەك: 0–0.5 مىنۇت، %2 B؛ 0.5–12 مىنۇت، %2–50 B؛ 12–14 مىنۇت، %50–98 B؛ 14–16 مىنۇت، %98 B؛ 16–16.1 مىنۇت، %98 B؛ 16.1–20 مىنۇت، %2 B. ئاپتوماتىك ئۈلگە ئېلىش ئۈسكۈنىسىدە تۈۋرۈك 40°C دا، ئەۋرىشكە 10°C دا ساقلىنىدۇ. ئېقىم سۈرئىتى 0.3 مىللىلىتىر/مىنۇت، ئوكۇل قىلىش مىقدارى 3 μl. ئېلېكترو پۈركۈش ئىئونلاشتۇرۇش (ESI) مەنبەسىگە ئىگە Q-Exactive Orbitrap ماسسا سپېكترومېتىرى (Thermo Fisher Scientific) تولۇق سىكانىرلاش ھالىتىدە ئىشلەنگەن ۋە ddMS2 كۆزىتىش ھالىتى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ، كۆپ مىقداردىكى سانلىق مەلۇماتلار توپلانغان. MS پارامېتىرلىرى تۆۋەندىكىدەك تەڭشەلگەن: پۈركۈش توك بېسىمى +3.8 kV/- 3.2 kV، كاپىللا تېمپېراتۇرىسى 320°C، قوغداش گازى 40 arb، ياردەمچى گاز 10 arb، زوند قىزىتقۇچ تېمپېراتۇرىسى 350°C، سىكانىرلاش دائىرىسى 70–1050 m/h، ئېنىقلىق دەرىجىسى 70000. سانلىق مەلۇماتلار Xcalibur 4.1 (Thermo Fisher Scientific) ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلگەن.
سانلىق مەلۇمات سۈپىتىنى باھالاش ئۈچۈن، ھەر بىر ئەۋرىشكەدىن 10 μL ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇقنى ئېلىۋېتىش ئارقىلىق بىرلەشتۈرۈلگەن سۈپەت كونترول (QC) ئەۋرىشكىلىرى ھاسىل قىلىندى. UPLC-MS سىستېمىسىنىڭ مۇقىملىقىنى باھالاش ئۈچۈن ئانالىز تەرتىپىنىڭ بېشىدا ئالتە قېتىم سۈپەت كونترول ئەۋرىشكىسى ئوكۇل قىلىندى. ئاندىن سۈپەت كونترول ئەۋرىشكىلىرى ۋاقىتلىق ھالدا تۈركۈمگە كىرگۈزۈلىدۇ. بۇ تەتقىقاتتىكى 11 تۈركۈمدىكى قان زەردابى ئەۋرىشكىسىنىڭ ھەممىسى LC-MS ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى. 100 ساغلام ئىئانە قىلغۇچىنىڭ قان زەردابى كۆلچىكى ئارىلاشمىسىنىڭ ئالىكوتاسى ئايرىم-ئايرىم تۈركۈملەردە پايدىلىنىش ماتېرىيالى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىپ، ئېلىش جەريانىنى نازارەت قىلىندى ۋە تۈركۈمدىن تۈركۈمگە تەسىرگە ماسلاشتۇرۇلدى. بايقاش گۇرۇپپىسى، ئىچكى دەلىللەش گۇرۇپپىسى ۋە تاشقى دەلىللەش گۇرۇپپىسىنىڭ نىشانسىز مېتابولومىك ئانالىزى سۈن ياتسېن ئۇنىۋېرسىتېتىنىڭ مېتابولومىك مەركىزىدە ئېلىپ بېرىلدى. گۇاڭدۇڭ تېخنىكا ئۇنىۋېرسىتېتى تەھلىل ۋە سىناق مەركىزىنىڭ تاشقى تەجرىبىخانىسىمۇ تۈرگە ئايرىغۇچ مودېلىنىڭ ئىقتىدارىنى سىناق قىلىش ئۈچۈن تاشقى گۇرۇپپىدىن 40 ئەۋرىشكە ئانالىز قىلدى.
ئېكىستراكسىيە ۋە قايتا قۇرۇشتىن كېيىن، قان زەردابىدىكى مېتابولىتلارنىڭ مۇتلەق مىقدارى كۆپ خىل رېئاكسىيە كۆزىتىش (MRM) ھالىتىدە ئېلېكترو پۈركۈش ئىئونلاشتۇرۇش (ESI) مەنبەسى بىلەن ئىنتايىن يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيە-تاندېم ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (Agilent 6495 ئۈچ تۆت پوللۇق) ئارقىلىق ئۆلچەندى. مېتابولىتلارنى ئايرىش ئۈچۈن ACQUITY BEH ئامىد تۈۋرۈكى (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, Waters) ئىشلىتىلدى. كۆچمە باسقۇچ 10 mmol/L ئاممونىي ئاتسېتات ۋە %0.1 ئاممىياك ئېرىتمىسى قوشۇلغان %90 (A) ۋە %5 ئاتسېتونىترىل (B) دىن تەركىب تاپقان. گرادىيېنت پروگراممىسى تۆۋەندىكىدەك: 0–1.5 مىنۇت, %0 B; 1.5–6.5 مىنۇت, %0–15 B; 6.5–8 مىنۇت, %15 B; 8–8.5 مىنۇت, %15–0 B; 8.5–11.5 مىنۇت, %0 B. ئاپتوماتىك ئۈلگە ئېلىش ئۈسكۈنىسىدە تۈۋرۈك 40 سېلسىيە گرادۇستا، ئەۋرىشكە 10 سېلسىيە گرادۇستا ساقلانغان. ئېقىم سۈرئىتى 0.3 مىللىلىتىر/مىنۇت، ئوكۇل قىلىش مىقدارى 1 μL بولغان. MS پارامېتىرلىرى تۆۋەندىكىدەك تەڭشەلگەن: كاپىللا توك بېسىمى ± 3.5 kV، نېبۇلىزاتور بېسىمى 35 psi، غىلاف گاز ئېقىمى 12 L/مىنۇت، غىلاف گاز تېمپېراتۇرىسى 350°C، قۇرۇتۇش گاز تېمپېراتۇرىسى 250°C ۋە قۇرۇتۇش گاز ئېقىمى 14 l/مىنۇت. تىرىپتوفان، پىرۇۋات، لاكتات، گىپوكسانتىن ۋە كىسانتىننىڭ MRM ئايلاندۇرۇش نىسبىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 205.0–187.9، 87.0–43.4، 89.0–43.3، 135.0–92.3 ۋە 151.0–107.9 بولغان. سانلىق مەلۇماتلار Mass Hunter B.07.00 (Agilent Technologies) ئارقىلىق توپلانغان. قان زەردابى ئەۋرىشكىلىرى ئۈچۈن، تىرىپتوفان، پىرۇۋات، لاكتات، گىپوكسانتىن ۋە كىسانتىن ئۆلچەملىك ئارىلاشما ئېرىتمىلىرىنىڭ كالىبراتسىيە ئەگرى سىزىقى ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇلدى. ھۈجەيرە ئەۋرىشكىلىرى ئۈچۈن، تىرىپتوفان مىقدارى ئىچكى ئۆلچەم ۋە ھۈجەيرە ئاقسىل ماسسىسىغا نورماللاشتۇرۇلدى.
ئەڭ يۇقىرى چېكىدىن ئايرىش (m/z ۋە ساقلاش ۋاقتى (RT)) بىرىكمە بايقاش 3.1 ۋە TraceFinder 4.0 (Thermo Fisher Scientific) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. تۈركۈملەر ئارىسىدىكى يوشۇرۇن پەرقنى يوقىتىش ئۈچۈن، سىناق ئەۋرىشكىسىنىڭ ھەر بىر خاسلىق چوققىسى ئوخشاش تۈركۈمدىكى پايدىلىنىش ماتېرىيالىنىڭ خاسلىق چوققىسىغا بۆلۈنۈپ، نىسبىي موللۇققا ئېرىشتى. ئۆلچەملەشتۈرۈشتىن ئىلگىرى ۋە كېيىن ئىچكى ئۆلچەملەرنىڭ نىسبىي ئۆلچەملىك چەتنىشى قوشۇمچە جەدۋەل 6 دا كۆرسىتىلدى. ئىككى گۇرۇپپا ئوتتۇرىسىدىكى پەرقلەر يالغان بايقاش نىسبىتى (FDR <0.05، Wilcoxon ئىمزالىق دەرىجە سىنىقى) ۋە قاتلىنىش ئۆزگىرىشى (>1.2 ياكى <0.83) بىلەن خاراكتېرلەندى. ئېلىنغان ئالاھىدىلىكلەرنىڭ خام MS سانلىق مەلۇماتلىرى ۋە پايدىلىنىش زەردابى تۈزىتىلگەن MS سانلىق مەلۇماتلىرى قوشۇمچە سانلىق مەلۇمات 1 ۋە قوشۇمچە سانلىق مەلۇمات 2 دا كۆرسىتىلدى. ئەڭ يۇقىرى چېكىدىن ئايرىش تۆت ئېنىقلانغان پەرقلەندۈرۈش سەۋىيەسىگە ئاساسەن ئېلىپ بېرىلدى، بۇنىڭ ئىچىدە ئېنىقلانغان مېتابولىتلار، پەرەز قىلىنغان ئىزاھاتلىق بىرىكمىلەر، پەرەز قىلىنغان ئىزاھاتلىق بىرىكمە سىنىپلىرى ۋە نامەلۇم بىرىكمىلەر 22 بار. Compound Discovery 3.1 (mzCloud, HMDB, Chemspider) دىكى سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ئىزدەشلىرىگە ئاساسەن، MS/MS غا ماس كېلىدىغان دەلىللەنگەن ئۆلچەملەرگە ماس كېلىدىغان ياكى mzCloud (نومۇر > 85) ياكى Chemspider دىكى ئېنىق ماس كېلىدىغان ئىزاھلارغا ئىگە بىئولوگىيىلىك بىرىكمىلەر ئاخىرىدا پەرقلىق مېتابولوملار ئارىسىدىكى ئارىلىق ماددا سۈپىتىدە تاللاندى. ھەر بىر ئالاھىدىلىك ئۈچۈن ئەڭ يۇقىرى ئىزاھلار قوشۇمچە سانلىق مەلۇمات 3 گە كىرگۈزۈلگەن. MetaboAnalyst 5.0 يىغىندى نورماللاشتۇرۇلغان مېتابولىت مىقدارىنىڭ بىر ئۆزگەرگۈچىلۈك ئانالىزى ئۈچۈن ئىشلىتىلدى. MetaboAnalyst 5.0 يەنە KEGG يولىنى بايىتىش ئانالىزىنى كۆرۈنەرلىك پەرقلىق مېتابولىتلارغا ئاساسەن باھالىدى. ئاساسلىق تەركىب ئانالىزى (PCA) ۋە قىسمەن ئەڭ كىچىك كۋادرات پەرقلەندۈرۈش ئانالىزى (PLS-DA) ropls يۇمشاق دېتال بولىقى (v.1.26.4) ئارقىلىق ستېك نورماللاشتۇرۇش ۋە ئاپتوماتىك كۆلەملەشتۈرۈش ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى. تۈگۈنچە يامان سۈپەتلىك ئۆسمىسىنى مۆلچەرلەش ئۈچۈن ئەڭ ياخشى مېتابولىت بىئوماركېر مودېلى ئەڭ كىچىك مۇتلەق كىچىكلەش ۋە تاللاش ئوپېراتورى (LASSO, R بولىقى v.4.1-3) بىلەن ئىككىلىك لوگىستىكا رېگرېسسىيەسى ئارقىلىق ھاسىل قىلىندى. پەرقلەندۈرۈش مودېلىنىڭ بايقاش ۋە دەلىللەش توپلاملىرىدىكى ئىقتىدارى pROC پاكىتىغا ئاساسەن ROC ئانالىزىغا ئاساسەن AUC نى مۆلچەرلەش ئارقىلىق خاراكتېرلەندى (v.1.18.0.). ئەڭ ياخشى ئېھتىماللىق چېكى مودېلنىڭ ئەڭ چوڭ يودېن كۆرسەتكۈچى (سەزگۈرلۈك + خاسلىق - 1) ئاساسىدا قولغا كەلتۈرۈلدى. قىممەت چەكتىن تۆۋەن ياكى چوڭ بولغان ئەۋرىشكىلەر ئايرىم-ئايرىم ھالدا ياخشى سۈپەتلىك تۈگۈنچە ۋە ئۆپكە ئۆسمىسى دەپ مۆلچەرلىنىدۇ.
A549 ھۈجەيرىلىرى (#CCL-185، ئامېرىكا تىپىدىكى مەدەنىيەت توپلىمى) ​​%10 FBS تەركىبى بار F-12K مۇھىتىدا ئۆستۈرۈلدى. SLC7A5 نى نىشان قىلغان قىسقا تۈكلۈك RNA (shRNA) تىزىملىكى ۋە نىشانسىز كونترول (NC) لېنتىۋىرۇس ۋېكتورى pLKO.1-puro غا كىرگۈزۈلدى. shSLC7A5 نىڭ ئانتىسېنسىيە تىزىملىكى تۆۋەندىكىچە: Sh1 (5′-GGAGAAACCTGATGAACAGTT-3′)، Sh2 (5′-GCCGTGGACTTCGGGAACTAT-3′). SLC7A5 غا قارشى ئانتىتېلا (#5347) ۋە تۇبۇلىن (#2148) ھۈجەيرە سىگنال تېخنىكىسىدىن سېتىۋېلىندى. SLC7A5 ۋە تۇبۇلىنغا قارشى ئانتىتېلا غەربىي بلوت ئانالىزى ئۈچۈن 1:1000 سۇيۇقلۇقتا ئىشلىتىلدى.
Seahorse XF گلىكولىز بېسىم سىنىقى ھۈجەيرە سىرتىدىكى كىسلاتالىشىش (ECAR) سەۋىيەسىنى ئۆلچەيدۇ. سىناق جەريانىدا، ECAR ئارقىلىق ئۆلچەنگەن ھۈجەيرە گلىكولىز ئىقتىدارىنى سىناق قىلىش ئۈچۈن، گلىكوزا، ئولىگومىتسىن A ۋە 2-DG ئارقا-ئارقىدىن بېرىلدى.
نىشانسىز كونترول (NC) ۋە shSLC7A5 (Sh1, Sh2) بىلەن ترانسفېكسىيە قىلىنغان A549 ھۈجەيرىلىرى دىئامېتىرى 10 سانتىمېتىر كېلىدىغان قاچىلارغا بىر كېچە قويۇپ قويۇلدى. ھۈجەيرە مېتابولىتلىرى 1 مىللىلىتىر مۇزدەك سوغۇق 80% سۇلۇق مېتانول بىلەن ئېلىنىپ چىقىرىلدى. مېتانول ئېرىتمىسىدىكى ھۈجەيرىلەر قىرىپ ئېلىنىپ، يېڭى تۇرۇباغا يىغىلىپ، 15000 × g دا 4 سېلسىيە گرادۇستا 15 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. 800 µl ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇقنى يىغىپ، يۇقىرى سۈرئەتلىك ۋاكۇئۇم قويۇقلاشتۇرغۇچ ئارقىلىق قۇرۇتۇڭ. ئاندىن قۇرۇتۇلغان مېتابولىت دانچىلىرى يۇقىرىدا دېيىلگەندەك LC-MS/MS ئارقىلىق تىرىپتوفان سەۋىيىسىگە تەھلىل قىلىندى. A549 ھۈجەيرىلىرىدىكى (NC ۋە shSLC7A5) ھۈجەيرە NAD(H) سەۋىيىسى ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن مىقدارلىق NAD+/NADH رەڭ ئۆلچەش ئۈسكۈنىسى (#K337, BioVision) ئارقىلىق ئۆلچەندى. مېتابولىتلارنىڭ مىقدارىنى نورماللاشتۇرۇش ئۈچۈن ھەر بىر ئەۋرىشكە ئۈچۈن ئاقسىل سەۋىيىسى ئۆلچەندى.
ئەۋرىشكە چوڭلۇقىنى دەسلەپكى بېكىتىشتە ھېچقانداق ستاتىستىكىلىق ئۇسۇل ئىشلىتىلمىدى. ئىلگىرىكى بىئوماركېر بايقاشقا قارىتىلغان مېتابولومىك تەتقىقاتلىرى15،18 چوڭلۇقنى بېكىتىشتىكى ئۆلچەم دەپ قارالدى، بۇ دوكلاتلار بىلەن سېلىشتۇرغاندا، بىزنىڭ ئەۋرىشكىمىز يېتەرلىك بولدى. تەتقىقات گۇرۇپپىسىدىن ھېچقانداق ئەۋرىشكە چىقىرىۋېتىلمىدى. قان زەردابى ئەۋرىشكىلىرى نىشانسىز مېتابولومىك تەتقىقاتى ئۈچۈن تاسادىپىي ھالدا بىر بايقاش گۇرۇپپىسىغا (306 ئەھۋال، 74.6%) ۋە ئىچكى دەلىللەش گۇرۇپپىسىغا (104 ئەھۋال، 25.4%) تەقسىم قىلىندى. بىز يەنە نىشانلىق مېتابولومىك تەتقىقاتى ئۈچۈن ھەر بىر گۇرۇپپىدىن تاسادىپىي ھالدا 70 ئەھۋالنى تاللىدۇق. تەكشۈرگۈچىلەر LC-MS سانلىق مەلۇمات توپلاش ۋە تەھلىل قىلىش جەريانىدا گۇرۇپپىنى تەقسىملەشتىن مەھرۇم بولدى. مېتابولومىك سانلىق مەلۇماتلىرى ۋە ھۈجەيرە تەجرىبىلىرىنىڭ ستاتىستىكىلىق ئانالىزى ئايرىم-ئايرىم نەتىجىلەر، رەسىم رىۋايەتلىرى ۋە ئۇسۇللار بۆلەكلىرىدە بايان قىلىندى. ھۈجەيرە تىرىپتوفان، NADT ۋە گلىكولىز پائالىيىتىنىڭ مىقدارىنى بېكىتىش ئۈچ قېتىم مۇستەقىل ھالدا ئېلىپ بېرىلدى، نەتىجىلەر ئوخشاش بولدى.
تەتقىقات لايىھىسى ھەققىدە تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرغا ئېرىشىش ئۈچۈن، بۇ ماقالىگە مۇناسىۋەتلىك تەبىئىي پورتفېل دوكلاتىنىڭ قىسقىچە مەزمۇنىغا قاراڭ.
ئېلىنغان ئالاھىدىلىكلەرنىڭ خام MS سانلىق مەلۇماتلىرى ۋە پايدىلىنىش قان زەردابىنىڭ نورماللاشتۇرۇلغان MS سانلىق مەلۇماتلىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا قوشۇمچە سانلىق مەلۇماتلار 1 ۋە قوشۇمچە سانلىق مەلۇماتلار 2 دە كۆرسىتىلدى. پەرقلىق ئالاھىدىلىكلەرنىڭ ئەڭ يۇقىرى ئىزاھلىرى قوشۇمچە سانلىق مەلۇماتلار 3 دە كۆرسىتىلدى. LUAD TCGA سانلىق مەلۇمات توپلىمىنى https://portal.gdc.cancer.gov/ دىن چۈشۈرۈۋالغىلى بولىدۇ. گىرافىك سىزىش ئۈچۈن كىرگۈزۈلگەن سانلىق مەلۇماتلار مەنبە سانلىق مەلۇماتلاردا كۆرسىتىلدى. مەنبە سانلىق مەلۇماتلىرى بۇ ماقالە ئۈچۈن تەمىنلەندى.
مىللىي ئۆپكە تەكشۈرۈش تەتقىقات گۇرۇپپىسى قاتارلىقلار. تۆۋەن مىقداردىكى كومپيۇتېرلىق توموگرافىيە ئارقىلىق ئۆپكە راكىنىڭ ئۆلۈش نىسبىتىنى تۆۋەنلىتىش. شىمالىي ئېنگلاند. J. Med. 365, 395–409 (2011).
Kramer, BS, Berg, KD, Aberle, DR ۋە Prophet, PC تۆۋەن مىقداردىكى سىپرال شەكىللىك CT ئارقىلىق ئۆپكە راكىنى تەكشۈرۈش: دۆلەتلىك ئۆپكە تەكشۈرۈش تەتقىقاتى (NLST) نىڭ نەتىجىلىرى. J. Med. Screen 18, 109–111 (2011).
دې كونىڭ، HJ قاتارلىقلار. تاسادىپىي سىناق جەريانىدا ھەجىملىك ​​CT تەكشۈرۈش ئارقىلىق ئۆپكە راكىنىڭ ئۆلۈش نىسبىتىنى تۆۋەنلىتىش. شىمالىي ئېنگلاند. J. Med. 382, ​​503–513 (2020).