CRISPR) ئۈچىنچى ئەۋلاد گېنوم تەھرىرلەش تېخنىكىسى: CRISPR دۇنيادا ئىنقىلاب قوزغىدى

توپلانغان دائىملىق ئارىلىقتىكى قىسقا پالىندروم تەكرارلىنىشلىرى (CRISPR) ئۈچىنچى ئەۋلاد گېنوم تەھرىرلەش تېخنىكىسى بولۇپ، يۇقىرى ئۈنۈملۈك نەتىجىلىرى بىلەن دۇنيادا ئىنقىلاب قوزغىغان. ئۇ ھەر خىل بىئولوگىيىلىك كېسەللىكلەر ۋە يۇقۇملىنىشلارنى داۋالاشتا ئىشلىتىلگەن. ھەر خىل باكتېرىيەلەر ۋە باشقا پروكارىئوتلار (مەسىلەن، ئارخېئا) نىڭمۇ فاگلاردىن مۇداپىئەلىنىش ئۈچۈن CRISPR/Cas9 سىستېمىسى بار. CRISPR/Cas9 ئاساسلىق ئىستراتېگىيەلەرنىڭ ئۆزگىرىشى مۇمكىن بولغان قارشىلىق كۆرسىتىش گېنلىرى، ترانسكرىپسىيە ۋە ئېپىگېنېتىك تەڭشەشنى نىشان قىلىش ئارقىلىق ئۈچ خىل مەنپىي كۆكرەك راكىنىڭ (TNBC) ئۆسۈشى ۋە ئىلگىرىلىشىنى توسالايدىغانلىقى دوكلات قىلىنغان. بۇ داۋالاش ئۇسۇللىرى TNBC دا كۆزىتىلگەن دورا قارشىلىقى قاتارلىق قىيىن مەسىلىلەرنى ھەل قىلىشقا ياردەم بېرىشى مۇمكىن. ھازىر، CRISPR/Cas9 نى نىشانلىق ھۈجەيرىلەرگە يەتكۈزۈش ئۈچۈن فىزىكىلىق (مىكرو ئوكۇل قىلىش، ئېلېكتروپوراتسىيە ۋە گىدرودىنامىك ھالەتلەر)، ۋىرۇسلۇق (ئادېنو بىلەن مۇناسىۋەتلىك ۋىرۇس ۋە لېنتىۋىرۇس) ۋە ۋىرۇسسىز (لىپوسوملار ۋە لىپىد نانو زەررىچىلىرى) قاتارلىق ھەر خىل ئۇسۇللار قوللىنىلماقتا. )- زەررىچىلەر). TNBC نىڭ مولېكۇلا سەۋەبلىرىنى تەتقىق قىلىش ئۈچۈن ھەر خىل مودېللار ئىجاد قىلىنغان بولسىمۇ، گېنوم تەھرىرلەش قوراللىرىنى تىرىك جانلىقلاردا تەمىنلەشتە سەزگۈر ۋە نىشانلىق ئۇسۇللارنىڭ كەمچىل بولۇشى ئۇلارنىڭ كلىنىكىلىق قوللىنىلىشىنى چەكلەيدۇ. قىسقىسى، بۇ باھالاشتا مەۋجۇت دەلىللەرگە ئاساسەن TNBC نى داۋالاشتا CRISPR/Cas9 نىڭ ئىلگىرىلىشى، خىرىسلىرى، چەكلىمىلىرى ۋە ئىستىقبالى ئومۇميۈزلۈك تەكشۈرۈلىدۇ. شۇنداقلا، سۈنئىي ئەقىل ۋە ماشىنا ئۆگىنىشنىڭ بىرلەشتۈرۈلۈشىنىڭ TNBC نى داۋالاشتا CRISPR/Cas9 ئىستراتېگىيىسىنى قانداق ياخشىلىيالايدىغانلىقىنى تەكىتلەيمىز.
راك كېسىلى كونترول قىلىنمايدىغان ھۈجەيرە بۆلۈنۈشى، ھۈجەيرە دەۋرىيلىكىنىڭ كونترول نۇقتىلىرىنىڭ بۇزۇلۇشى ۋە ئۆسمە باستۇرغۇچى گېن (TSGs) دىكى مۇتاتسىيە بىلەن خاراكتېرلىنىدۇ (Matthews قاتارلىقلار، 2022). ھەر خىل راك تۈرلىرى ئىچىدە، كۆكرەك راكى ئاياللاردا ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان راك تۈرى بولۇپ، دۇنيا مىقياسىدا ئۆلۈش نىسبىتى يۇقىرى (Waks ۋە Winer، 2019). كۆكرەك راكى گىستولوگىيەلىك ۋە بىئولوگىيىلىك ئالاھىدىلىكلەر، كلىنىكىلىق كۆرۈنۈش ۋە خۇلق-ئاتۋار، داۋالاشقا بولغان ئىنكاس قاتارلىق كۆپ خىل ئالاھىدىلىكلەرگە ئىگە بولغان كۆپ خىل كېسەللىك (Weigelt قاتارلىقلار، 2010). كۆكرەك راكىنىڭ تۈرگە ئايرىلىشى كۆكرەك راكىنى دىئاگنوز قويۇش ۋە ئۆسمە كېسىلىنىڭ ئالدىن پەرەز قىلىنىشى ئۈچۈن ئېنىق چۈشەنچە بېرىدۇ. ئورتاق بىئو بەلگىلەر ۋە كلىنىكىلىق پاتولوگىيىلىك ئالاھىدىلىكلەرنى ئىشلىتىش كۆكرەك راكىنى تۈرگە ئايرىشنىڭ ئاساسلىق ئۆلچىمى بولۇپ كەلدى (Tsang ۋە Tse، 2019). كۆكرەك راكىنىڭ ئالدىن پەرەز قىلىنىشى ۋە داۋالاشقا بولغان ئىنكاسى ئېستروگېن رېتسېپتورى (ER)، پروگېستېرون رېتسېپتورى (PR)، ئىنسان ئېپىدېرمىسى ئۆسۈش ئامىلى رېتسېپتورى 2 (HER2/neu) نىڭ بولۇشى ۋە گىستولوگىيەلىك دەرىجىسى، ئۆسمە تىپى ۋە دەرىجىسى قاتارلىق نۇرغۇن ئامىللارنىڭ تەسىرىگە ئۇچرايدۇ. چوڭ-كىچىكلىكى ۋە لىمفا تۈگۈنىنىڭ مېتاستازى (ئەل-تۇبائىتى، 2020). كۆكرەك راكىنىڭ بەش خىل ئىچكى مولېكۇلا تۈرى ئېنىقلاندى، بۇنىڭ ئىچىدە لۇمىنال A، لۇمىنال B، HER2 بىلەن بايىتىلگەن، بازالغا ئوخشاش ۋە كلاۋدىن تۆۋەن (پرات قاتارلىقلار، 2015). TNBC بارلىق ER، PR ۋە HER2 نى ئىپادىلىمەيدىغان بىر خىل مولېكۇلا تۈرىدىكى راك (يىن قاتارلىقلار، 2020). بۇ پاتولوگىيىلىك ئالاھىدىلىكلەر TNBC بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ، ئۇنىڭ تېز تەرەققىي قىلىدىغانلىقىنى ۋە باشقا ھەر قانداق تىپتىكى كۆكرەك راكىغا قارىغاندا تېخىمۇ تاجاۋۇزچى تەبىئىتىنى ئىسپاتلايدۇ (فېڭ قاتارلىقلار، 2018). بۇنىڭدىن باشقا، پېرۇ قاتارلىقلار (2000) مىكرو ئارراي تېخنىكىسىنى ئىشلىتىپ كۆكرەك راكىنى قايتا تۈرگە ئايرىدى ۋە كۆكرەك راكىنىڭ بەش خىل ئىچكى تۈرىنى ئېنىقلىدى (كادېناس، 2012). بازالغا ئوخشاش كۆكرەك راكى ئۈچ خىل مەنپىي فېنوتىپقا ئىگە ۋە تېز تەرەققىي قىلىدىغان بىر خىل كۆكرەك راكىنىڭ بىر تۈرى. شۇنىڭغا دىققەت قىلىش كېرەككى، بارلىق بازىلىق كۆكرەك راكى ئادەتتە TNBC دەپ خاتا دىئاگنوز قويۇلىدۇ، ئەمما پەقەت %77 ىلا TNBC؛ ئەكسىچە، TNBC نىڭ %71-91 ى بازىلىق كۆكرەك راكى بولۇپ، بۇ ئىككى خىل كۆكرەك راكىنىڭ بىر-بىرىگە چېتىلىپ، ئوخشىمايدىغان تۈرگە ئايرىلىشىنى ئىپادىلەيدۇ (Wang D.-Y. قاتارلىقلار، 2019). بۇ، TNBC نىڭ كۆپ خىللىقىنى خاراكتېرلەندۈرۈش ۋە كېسەللىك پراكتىكىنى ئېنىقلاش ۋە ھازىرقى ۋە كەلگۈسىدىكى داۋالاش ئۇسۇللىرىغا بولغان مۇمكىن بولغان ئىنكاسنى ئېنىقلاش ئېھتىياجىنى پەيدا قىلىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، TNBC بارلىق كۆكرەك راكى ئەھۋاللىرىنىڭ %15-20 نى ئىگىلەيدۇ ۋە 50 ياشتىن تۆۋەن ئاياللاردا كۆپ ئۇچرايدۇ. TNBC ئەھۋاللىرىنىڭ تەخمىنەن %20 ىدە BRCA1 ياكى BRCA2 گېن ئۆزگىرىشى دوكلات قىلىنغان (Xie قاتارلىقلار، 2017؛ Tzikas قاتارلىقلار، 2017). ، 2020). تەتقىقاتلار يەنە TNBC نىڭ ئۆزىگە خاس ئىممۇنىتېت مىكرو مۇھىتىغا ئىگە ئىكەنلىكىنى، بۇنىڭ ئىچىدە قان تومۇر ئېندوتېلىي ئۆسۈش ئامىللىرى، ئۆسمە بىلەن مۇناسىۋەتلىك ماكروفاگلار (TAMs)، ئۆسمىگە سىڭىپ كىرىدىغان لىمفا ھۈجەيرىلىرى (TILs) ۋە ئۆسمە ئۆسۈشى ۋە كۆچۈشىگە قاتنىشىدىغان باشقا مولېكۇلالارنىڭ يۇقىرى سەۋىيىدىكى تەركىبلىرى بارلىقىنى كۆرسەتتى. شۇڭا، TNBC نىڭ مىكرو مۇھىتىنى چۈشىنىش ئۇنىڭ دىئاگنوزى ۋە داۋالاش ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم (Fan and He, 2022).
TNBC نىڭ دىئاگنوزىنى باھالاش ۋە ئۈنۈملۈك داۋالاشنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، ئاساسلىقى ER، PR ۋە HER2 نى بايقاش ئۈچۈن ئىممۇنوگىستوخىمىيە (IHC) ۋە كۆكرەك ئۆسمىسىنى بايقاش ئۈچۈن مامموگرافىيەگە ئاساسلانغان توغرا دىئاگنوز قويۇش مۇھىم. قانداقلا بولمىسۇن، مامموگرافىيە نېكروز ۋە فىبروز قاتارلىق ئۆسمە ئىچىدىكى ئالاھىدىلىكلەرنى يېتەرلىك دەرىجىدە كۆرسىتىپ بېرەلمەيدۇ (Deepak Singh قاتارلىقلار، 2021). ناچار دىئاگنوز ۋە دىئاگنوز دوختۇرلارنىڭ توغرا دورىلارنى يېزىپ بېرىشىگە توسقۇنلۇق قىلغاچقا (Chaudhary، 2020)، TNBC بىمارلىرىغا داۋالىنىشنى ياخشىلاش ئۈچۈن ھەر خىل ئۇسۇللار قوللىنىلىۋاتىدۇ. ھازىر، TNBC بىمارلىرىغا دوكسورۇبىتسىن ۋە سىكلوفوسفامىد قاتارلىق ئىككى خىل دورا ئىشلىتىلىپ، ياخشى نەتىجىلەرنى كۆرسەتتى. بۇنىڭدىن باشقا، كاربوپلاتىن ۋە سىسپلاتىن قاتارلىق باشقا پىلاتىنا دورىلىرى ئىشلىتىلىدۇ (Sikov قاتارلىقلار، 2015). بۇنىڭدىن باشقا، Olaparib، Velaparib ۋە PF-01367338 قاتارلىق PARP چەكلىگۈچىلىرى TNBC نى داۋالاشتا خىمىيىلىك داۋالاش دورىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىۋاتىدۇ (Ishino قاتارلىقلار، 2018). Wnt/b-Catenin، NOTCH ۋە Hedgehog سىگنال يوللىرىنىڭ TNBC نىڭ پەيدا بولۇشى ۋە ئىلگىرىلىشىگە چېتىشلىق ئىكەنلىكى دوكلات قىلىنغانلىقتىن، بۇ يوللارغا دورىلارنى نىشان قىلىش مۇھىم ئىستراتېگىيە بولۇشى مۇمكىن (Aysola قاتارلىقلار، 2013). گەرچە ئوپېراتسىيە، رادىئاتسىيەلىك داۋالاش ۋە خىمىيەلىك داۋالاش بۈگۈنكى كۈندە TNBC نى داۋالاشنىڭ ئاساسلىق ئۇسۇلى بولسىمۇ، نىشانلىق داۋالاش، ئىممۇنىتېت داۋالاش، Cas9n، dCas9، CRISPR/Cas12 قاتارلىق ھەر خىل CRISPR غا مۇناسىۋەتلىك گېن تەھرىرلەش قوراللىرى، ئاساسلىق تەھرىرلەش ۋە CRISPR/Cas9 غا قارىتىلغان گېن داۋالاش قاتارلىق يېڭى داۋالاش ئۇسۇللىرىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشتا زور ئىلگىرىلەشلەر قولغا كەلتۈرۈلدى. بۇ يەردە بىز TNBC نى داۋالاشتا ئىشلىتىلىدىغان ھەر خىل CRISPR غا مۇناسىۋەتلىك گېن تەھرىرلەش قوراللىرىغا دىققەت قىلىمىز. بۇلارنىڭ ئىچىدە CRISPR/Cas9 كەڭ كۆلەمدە دىققەت قوزغىدى.
Cas9n، يەنە Cas9 نىكازا دەپمۇ ئاتىلىدۇ، CRISPR/Cas9 گېنوم تەھرىرلەش سىستېمىسىدىن ئېلىنغان Cas9 ئاقسىلىنىڭ گېن ئۆزگەرتىلگەن بىر خىل ۋارىيانتى (Gupta et al., 2019). ئەسلى شەكلىدە، Cas9 ئاقسىلى ئىككى يادرو رايونىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ: RuvC ۋە HNH، بۇنىڭ ئاساسلىق رولى ئىككى DNA زەنجىرىنىڭ پارچىلىنىشى. قانداقلا بولمىسۇن، Cas9n دا، يادرو رايونلىرىنىڭ بىرى بولغان HNH گېن جەھەتتىن مۇتاتسىيەگە ئۇچراپ، ئاكتىپسىز بولۇپ قالىدۇ. شۇڭا، Cas9n نىڭ HNH رايونى ئىقتىدارسىز قالىدۇ. پەقەت RuvC رايونى ئاكتىپ بولۇپ، Cas9n نىڭ يەككە DNA زەنجىرلىرىدە ئۈزۈلۈش ھاسىل قىلىشىغا يول قويىدۇ (Trevino ۋە Zhang, 2014). Cas9 بىلەن سېلىشتۇرغاندا، Cas9n نىشاندىن سىرتقى تەسىرلەرنى ئۈنۈملۈك ئازايتىپ، ھۈجەيرە رېمونت قىلىش مېخانىزمىنى توغرا ياخشىلىيالايدۇ. Cas9n قوش زەنجىرلىك DNA دىكى مەلۇم ئورۇنلاردا ئۈزۈلۈش ھاسىل قىلىش قاتارلىق ھەر خىل مەسىلىلەرنى ھەل قىلىشقا ئىشلىتىلىدۇ. بۇ مەقسەت ئۈچۈن، ئىككى Cas9n مولېكۇلاسى بىرلەشتۈرۈلۈپ، بىرلىكتە ئىشلىتىلدى (Yee, 2016). ئارىلاشما لىنىيەلىك كىنازا 3 (MLK3) مىتوگېن تەرىپىدىن ئاكتىپلاشتۇرۇلغان ئاقسىل كىنازا بولۇپ، TNBC مېتاستازى جەريانىدا مۇھىم تەڭشىگۈچ رولىنى ئوينايدۇ (Cronan قاتارلىقلار، 2012).
MLK3 كۆپ خىل سىگنال يوللىرىنى ئاكتىپلاشتۇرۇپ، TNBC مېتاستازىغا ئېلىپ بارىدۇ. مەسىلەن، c-Jun N-تېرمىنال كىنازا (JNK) يولى ھۈجەيرە ھەرىكەتچانلىقى ۋە ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماترىسسا پارچىلىنىشىنى تەڭشەيدۇ، MLK3 بولسا JNK يولىنى ئاكتىپلاشتۇرۇپ، شۇ ئارقىلىق ھۈجەيرە ھەرىكەتچانلىقىنى كۈچەيتىپ، تاجاۋۇزچىلىق خۇسۇسىيىتىنى بېرىدۇ (Rattanasinchai ۋە Gallo, 2016). MLK3 يەنە EMT نى تەڭشەيدۇ. بۇنى قىلىش ئۈچۈن، ئۇ Snail، Slug ۋە Twist قاتارلىق تۆۋەنكى ئېقىمدىكى ترانسكرىپسىيە ئامىللىرىنى ئاكتىپلاشتۇرىدۇ. بۇ ئامىللار ئېپىتېلىي بەلگىلىرىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى توسىدۇ ۋە مېزېنخىما بەلگىلىرىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ، بۇ مېتاستاتىك فېنوتىپنىڭ ھاسىل بولۇشىغا ئېلىپ كېلىدۇ (Casalino قاتارلىقلار، 2023). MLK3 نىڭ ECM نى قايتا قۇرۇش ۋە ECM نى پارچىلايدىغان ماترىسسا مېتاللوپروتېئىنازا (MMPs) قاتارلىق پروتېئازالارنىڭ ئاكتىپلىنىشىدا رول ئوينايدىغانلىقى كۆزىتىلگەن. بۇ راك ھۈجەيرىسىنىڭ تاجاۋۇز قىلىشى ۋە يىراق جايلارغا تارقىلىشىنى ئاسانلاشتۇرىدۇ (Katari قاتارلىقلار، 2019). شۇڭا، ئىلگىرىكى تەتقىقاتلار MLK3 نىڭ TNBC دا مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسەتتى. راتتاناسىنچاي ۋە گاللو TNBC مودېللىرىنى ئىشلىتىپ MLK3 نىڭ رولىنى تەتقىق قىلدى ۋە ئۇنىڭ ئالاھىدە سىگنال يوللىرى ئارقىلىق راك كېسىلىنىڭ تەرەققىياتىنى ئىلگىرى سۈرىدىغانلىقىنى بايقىدى. ئۇلار MLK3 نى تەھرىرلەش ئۈچۈن CRISPR/Cas9n نى ئىشلەتتى ۋە TNBC مېتاستازىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىگەنلىكىنى كۆزەتتى (راتتاناسىنچاي ۋە گاللو، 2016).
dCas9، كۆپىنچە ئاكتىپسىز Cas9 دەپ ئاتىلىدۇ، Cas9 ئاقسىلىنىڭ ئۆزگەرتىلگەن ھاسىل شەكلى. ئاكتىپ Cas9 دىن پەرقلىق ھالدا، dCas9 ئېندونۇكلېئازا پائالىيىتىگە ئىگە ئەمەس، شۇڭا ئۇ DNA قوش زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشنى قوزغىيالمايدۇ. شۇڭا، dCas9 نى DNA تەرتىپىدە ھېچقانداق ئۆزگىرىش ياكى ئۆزگەرتىش بولماستىن گېنومنىڭ مەلۇم رايونلىرىنى ئېنىق نىشانلاش ئۈچۈن ئىشلىتىشكە بولىدۇ (Wang et al., 2016). dCas9 دا، ئىككى ئېندونۇكلېئازا ئاقسىلى، RuvC ۋە HNH، مۇھىم ئامىنو كىسلاتا قالدۇقلىرىنى باستۇرۇش ئارقىلىق ئاكتىپسىزلىنىدۇ. (Richter et al., 2016). DNA پارچىلاش پائالىيىتىنىڭ كەمچىل بولۇشىغا قارىماي، dCas9 گېن تەتقىقاتى ۋە بىئوتېخنىكا ساھەسىدە بىر قاتار مۇھىم رول ئوينايدۇ. مەسىلەن، ئۇ گېنومنىڭ مەلۇم رايونلىرىنى كۆرسىتىشكە يول قويىدۇ، ترانسكرىپسىيەنى تەڭشەشنى ئاسانلاشتۇرىدۇ ۋە ئېپىگېنېتىك ئۆزگەرتىشلەرنى ئىلگىرى سۈرىدۇ (Brocken et al., 2018).
ترانسكرىپسىيە فاكتورى ZEB1 (سىنىك بارماق E-قۇتىسى باغلىنىشلىق homeobox 1) ئېپىتېلىي-مېزېنخىما ئۆتكۈنچى (EMT) جەريانىنى ۋاسىتىچىلىك قىلىشتا ئالاھىدە ۋە مۇھىم رول ئوينايدۇ، بۇ ھۈجەيرە ئېمبىرىئونال تەرەققىيات، توقۇلمىلارنى رېمونت قىلىش ۋە راك كېسىلىنىڭ ئىلگىرىلىشى جەريانىدا يۈز بېرىدىغان بىر ھۈجەيرە جەريانى. ئۇ ئېپىتېلىي ھۈجەيرىلىرىنىڭ مېزېنخىما ھۈجەيرىلىرىگە ئۆزگىرىشىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ، نەتىجىدە ھۈجەيرە مورفولوگىيەسى، ھەرىكەتچانلىقى، تاجاۋۇزچانلىقى قاتارلىقلاردا ئۆزگىرىشلەر كۆرۈلىدۇ (Wu قاتارلىقلار، 2020). ZEB1 TNBC دىكى ئېپىتېلىي ھۈجەيرىلىرىنىڭ ھۈجەيرە-ھۈجەيرە چاپلىشىشى ۋە قۇتۇپلىشىشىنى ساقلاشقا مەسئۇل بولغان E-كادھېرىن ۋە ئوككلۇدىن قاتارلىق كۆپ خىل ئېپىتېلىي بەلگىلىرىنى توسىدۇ (Moreno-Bueno قاتارلىقلار، 2008). بۇنىڭدىن باشقا، ZEB1 N-كادھېرىن، ۋىمېنتىن ۋە فىبرونېكستىن قاتارلىق بەزى بەلگىلەرنى ئاكتىپلاشتۇرىدۇ (Konradi قاتارلىقلار، 2014)، شۇنداقلا Rho GTPaza ۋە ماترىكسا مېتاللوپروتېئىنازا (MMPs) قاتارلىق سىتوسكېلېت قايتا قۇرۇشقا قاتناشقان گېنلارنى تەڭشەيدۇ (Huang قاتارلىقلار، 2014). 2022)، بۇنىڭدىن باشقا، ئۇ يەنە ئۆزگەرتىش ئۆسۈش ئامىلى-β (TGF-β)، Wnt سىگنالى قاتارلىق ھەر خىل سىگنال يوللىرىغا تەسىر كۆرسىتىپ، TNBC دا ئۆسمە تاجاۋۇزى ۋە مېتاستازنى ئىلگىرى سۈرىدۇ (Chen قاتارلىقلار، 2016). نۇرغۇن تەتقىقاتلار ۋە ئىلمىي دەلىللەر ZEB1 نىڭ TNBC نى بايقاش ۋە داۋالاشتا قىممەتلىك ۋاسىتە سۈپىتىدە زور پوتېنسىيالغا ئىگە ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. يېقىنقى بىر تەتقىقاتتا، Waryah قاتارلىقلار TNBC مودېلىنى ئىشلىتىپ، dCas9 ئارقىلىق ZEB1 نى تولۇق باستۇرۇشقا ئېرىشتى. شۇڭا، ئۇلار تىرىك جانلىقلار شارائىتىدا ZEB1 نىڭ ئىنتايىن يۇقىرى ئۆزگىچەلىكى ۋە دېگۈدەك تولۇق چەكلىنىشىنى كۆزەتتى (Waryah قاتارلىقلار، 2023).
CRISPR/Cas12 بولسا CRISPR/Cpf1 دەپ ئاتىلىدىغان گېن تەھرىرلەش قورالى. ئۇ CRISPR/Cas سىستېمىسىدىن كەلگەن بولۇپ، Cas12 دېگەن سۆز CRISPR بىلەن مۇناسىۋەتلىك 12 ئاقسىلىنى كۆرسىتىدۇ (Bharathkumar قاتارلىقلار، 2022)، بۇ ئاقسىل Cas9 غا پۈتۈنلەي ئوخشايدۇ. بىردىنبىر پەرقى شۇكى، ئۇنىڭ تەركىبىدە Cas12 ئاقسىلى بار. Cas9 بىلەن سېلىشتۇرغاندا، Cas12 نىڭ گېن تەھرىرلەش جەريانىدا يېپىشقاق ئۇچلارنى ھاسىل قىلىش قاتارلىق ئۆزگىچە ئىقتىدارلىرى بار، Cas9 بولسا ئۇچسىز ئۇچلارنى ھاسىل قىلىدۇ (Wang قاتارلىقلار، 2021). Cas12 نىڭ بۇ خۇسۇسىيىتى ئۇنىڭ ئالاھىدە DNA باشقۇرۇش تېخنىكىسىغا تۆھپە قوشىدۇ. نىشان DNA نى ئېنىق تونۇپ كېسىش ئىقتىدارىغا ئىگە ئاقسىل بولۇش سۈپىتى بىلەن، ئۇ ئادەتتىن تاشقىرى كۆپ ئىقتىدارلىق بولۇپ، ئۇنى گېن تەھرىرلەش قاتارلىق ھەر خىل قوللىنىشچان پروگراممىلار ئۈچۈن ئۈنۈملۈك قورالغا ئايلاندۇرىدۇ (Pickar-Oliver ۋە Gersbach، 2019).
باشقا CRISPR ۋارىيانتلىرىغا ئوخشاش، CRISPR/Cas12 يەنە TNBC دىكى گېنلارنى يوقىتىش ياكى ئاكتىپلاشتۇرۇش ئىقتىدارىغا ئىگە بولۇپ، ئۇنىڭ پاتوگېنىزى ياكى داۋالاشقا بولغان ئىنكاسىدا مۇھىم رول ئوينايدىغان گېنلارنى نىشان قىلىدۇ (Yang ۋە Zhang, 2023). بۇ جەرياننى ئەمەلگە ئاشۇرۇش ئۈچۈن، Cas12 نى نىشان گېنغا يېتەكلەيدىغان بىر يېتەكچى RNA (gRNA) ئىجاد قىلىندى. Cas12 نىشانغا باغلانغاندىن كېيىن، DNA دا قوش زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشلەرنى كىرگۈزىدۇ ۋە DNA رېمونت قىلىش مېخانىزمىنى ئاكتىپلاشتۇرىدۇ. رېمونت قىلىش جەريانىدا، خاتا نۇكلېئوتىدلار قوشۇلۇپ، گېن مۇتاتسىيەسى ۋە ئىقتىدارنىڭ يوقىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن (Zhang et al., 2021a). بۇنىڭدىن باشقا، Cas12 ئېنزىمىنىڭ ياخشىلانغان نۇسخىسى (dCas12 دەپ ئاتىلىدۇ) گېنلارنى ئاكتىپلاشتۇرۇش ئۈچۈنمۇ ئىشلىتىلدى. ئۇنى ترانسكرىپسىيە ئاكتىپلاشتۇرغۇچىسى بىلەن بىرلەشتۈرۈش ئارقىلىق، بەزى گېنلارنى قوزغىتىپ، ئۇلارنى ئاكتىپلاشتۇرغىلى بولىدۇ. بۇ تېخنىكا ئۆسمە باستۇرغۇچى گېنلارنىڭ ئاكتىپلىنىشىنى ئىلگىرى سۈرۈشتە زور پوتېنسىيالغا ئىگە (Sultan et al., 2022).
ئاساسلىق تەھرىرلەش يېڭى تەرەققىي قىلدۇرۇلغان ۋە ئىنتايىن ئۈستۈن گېنوم تەھرىرلەش تېخنىكىسى. ئۇ ئورگانىزمنىڭ DNA سىنى ناھايىتى ئېنىق ئۆزگەرتەلەيدۇ (Chen ۋە Liu, 2023). ئاساسلىق تەھرىرلەش ئىككى ئاساسلىق تەركىبنى بىرلەشتۈرۈش ئارقىلىق ئەمەلگە ئاشىدۇ: ئۆزگەرتىلگەن CRISPR/Cas9 ئېنزىم ۋە تەتۈر ترانسكرىپتازا. CRISPR/Cas9 ئېنزىمىنىڭ رولى گېنومدىكى ئېنىق ئورۇنلارنى تاللاپ نىشانلاش، تەتۈر ترانسكرىپتازا بولسا نىشاندىكى ئورۇندىكى DNA نى تولۇق ئۆزگەرتىشكە ياردەم بېرىدۇ (Hassan et al., 2021). ئاساسلىق تەھرىرلەش مېخانىزمىدا، تۇنجى قەدەم ئاساسلىق تەھرىرلەش قوللانمىسى RNA (pegRNA) نى ياساشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ (Standage-Beier et al., 2021). ئۇ نىشان DNA دىكى ئارزۇ قىلىنغان تەھرىرلەش ئورنىغا ماس كېلىدىغان نىشان تەرتىپى ۋە RNA قېلىپىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. ئاندىن pegRNA ئاساسلىق تەھرىرلەش نۇكلېئازا (PE2) بىلەن بىرلىكتە نىشان ھۈجەيرىلىرىگە كىرگۈزۈلىدۇ. PE2 بولسا Cas9 ئېنزىم، تەتۈر ترانسكرىپتازا ۋە ئاساسلىق تەھرىرلەش ماسلاشتۇرغۇچتىن تەركىب تاپقان بىرىكمە ئاقسىل (Martín-Alonso et al., 2021). ھۈجەيرە ئىچىدە، pegRNA ۋە PE2 بىرىكمىلىرى ئۆزگەرتمەكچى بولغان كونكرېت DNA نى ئىزدەيدۇ. Cas9 ئېنزىمى DNA نى كېسىپ، يەككە زەنجىرلەردىن تەركىب تاپقان قېلىپ ھاسىل قىلىدۇ (Choi et al., 2022). تەتۈر ترانسكرىپتازا بۇ قېلىپنى ئىشلىتىپ DNA نى تەھرىرلەشكە تەييارلايدۇ. DNA نى كۆچۈرۈش بىلەن بىرگە، RNA قېلىپىنى تەھرىرلەش كۆرسەتمىلىرىمۇ قوشۇلغان. ئاخىرىدا، يېڭى يارىتىلغان DNA زەنجىرى DNA دىكى ئۈزۈلۈشنى رېمونت قىلىش ئۈچۈن قېلىپ سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ، نەتىجىدە ئارزۇ قىلىنغان ئۆزگەرتىشنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئۆزگەرتىلگەن DNA تەرتىپى ھاسىل بولىدۇ (Ochoa-Sanchez et al., 2021). باشلانغۇچ تەھرىرلەش مېخانىزمى گېنلاردا كەڭ كۆلەمدە مۇتاتسىيە پەيدا قىلىشى مۇمكىن. ئۇ نۇقتا مۇتاتسىيەسى، كىرگۈزۈش، ئۆچۈرۈش ۋە ھەتتا گېن ئالماشتۇرۇشنى نىشان قىلالايدۇ (Anzalone et al., 2019; Chen and Liu, 2023). باشلانغۇچ تەھرىرلەش ئىلگىرىكى گېنوم تەھرىرلەش تېخنىكىلىرىغا قارىغاندا بىر قاتار ئەۋزەللىكلەرنى تەمىنلەيدۇ. بۇلار ئېنىقلىقنىڭ ئېشىشى، نىشاندىن سىرتقى تەسىرنىڭ ئازىيىشى ۋە DNA قوش زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشلەرگە تايانماي DNA نى تەھرىرلەش ئىقتىدارىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ (Anzalone et al., 2020).
CRISPR/Cas9 تېخنىكىسى دەسلەپتە باكتېرىيەلەرنى پلازمىد يۆتكىلىشى ۋە فاگ يۇقۇملىنىشىدىن قوغداش ئۈچۈن ئىجاد قىلىنغان بولۇپ، كېيىن گېنوم تەھرىرلەش ئۈچۈن ئۈنۈملۈك RNA ئاساسلىق DNA نىشانلاش قورالى سۈپىتىدە قايتا ئىشلىتىلگەن (Jiang ۋە Doudna, 2017). بۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 سىستېمىسىنىڭ باكتېرىيە ۋە كونا گېنوملارنىڭ ئايرىم-ئايرىم ھالدا %50 ۋە %87 ىدە مەۋجۇت ئىكەنلىكى خەۋەر قىلىنغان (Ishino قاتارلىقلار، 2018). CRISPR/Cas9 تىرىك جانلىق ۋە تىرىك جانلىقلار شارائىتىدا نورمالسىز گېن تەرتىپىنى ئۆچۈرۈش، كىرگۈزۈش ۋە تۈزىتىش ئۈچۈن مۇمكىن بولغان قورال (Sabit قاتارلىقلار، 2021). ئۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 نىڭ نىشانلىق گېنلارغا بولغان ئالاھىدىلىكى سەۋەبىدىن، ئۇنىڭ ماسلىشىشچان ئىممۇنىتېت سىستېمىسىنىڭ بىر قىسمى ئىكەنلىكى ئىسپاتلانغان (Chen ۋە Zhang, 2018).
CRISPR/Cas9 Cas9 ۋە يەككە يېتەكچى RNA (sgRNA) دىن تەركىب تاپقان. Cas9 كۆپ خىل ئاقسىل تەركىبلىرىدىن تەركىب تاپقان ئېندونۇكلېئازا. بۇنىڭدىن باشقا، Cas9 ئۆزگىچە قۇرۇلما ۋە ماسلىشىش خۇسۇسىيىتىگە ئىگە (Pacesa قاتارلىقلار، 2022)، چۈنكى ئۇ ئىككى پارچە: تونۇش (REC) ۋە نۇكلېئازا (NUC) دىن تەركىب تاپقان. REC پارچە يەنە ئۈچ رايونغا بۆلۈنىدۇ: REC1، REC2 ۋە كۆۋرۈك سىپراللىرى (Cromwell قاتارلىقلار، 2018). NUC ئۈچ پارچە، يەنى RuvC (RuvC I، RuvC II، RuvC III)، HNH ۋە پروتوسپاسېر قوشنا موتىف (PAM) ئۆز-ئارا تەسىر دائىرىسىدىن تەركىب تاپقان (1-رەسىم) (Song قاتارلىقلار، 2016). sgRNA ئىككى تەركىبتىن تەركىب تاپقان، بۇنىڭ ئىچىدە CRISPR RNA (crRNA) ۋە كودلايدىغان كىچىك RNA (izers RNA) بار (1-رەسىم). sgRNA Cas9 ئاقسىلىنى كوننېكسىنلارغا باغلاپ، ئاكتىپ بىرىكمە ھاسىل قىلىدۇ، بۇ يەنە ئۈنۈم بىرىكمىسى دەپمۇ ئاتىلىدۇ (Richter قاتارلىقلار، 2012). crRNA نىشان DNA تىزىملىكىنى تونۇشتا مۇھىم رول ئوينايدىغان 18-20 نۇكلېئوتىد ئاساس جۈپى. بۇنىڭدىن باشقا، crRNA نىشان DNA بىلەن جۈپلىشىدۇ، tracrRNA بولسا Cas9 يادرو ئېنزىمىنىڭ نىشان DNA غا باغلىنىشى ئۈچۈن قۇرۇلما رولىنى ئوينايدۇ (Manghwar قاتارلىقلار، 2019). يەنە بىر تەرەپتىن، PAM تىزىملىكىدە 3 نۇكلېئوتىد بار، بۇ ئۈنۈم بىرىكمىسىنىڭ DNA غا باغلىنىشىنى جەزملەشتۈرىدۇ، بەلگىلەيدۇ ۋە ۋاسىتىچىلىك قىلىدۇ. Cas9 ئاقسىل مۇرەككەپ تارماق بىرلىكلىرى RuvC ۋە HNH كاتالىزاتورلۇق ئاكتىپلىققا ئىگە (Richter قاتارلىقلار، 2012؛ Asmamaw ۋە Zawdie، 2021). Cas9 تارماق بىرلىكىنىڭ HNH يادرو ئېنزىم دائىرىسى crRNA بىلەن مۇناسىۋەتلىك DNA زەنجىرىنى پارچىلايدۇ. RuvC يادروسى دومېنىسى باشقا DNA زەنجىرلىرىنى پارچىلاپ، قوش زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشلەرنى (DSB) ھاسىل قىلىدۇ، ئۇنىڭدىن كېيىن ئىككى خىل DNA ئۈزۈلۈش رېمونت قىلىش مېخانىزمى قوزغىلىدۇ (Jiang ۋە Doudna, 2017) (1-رەسىم).
1-رەسىم. CRISPR/Cas9 نىڭ ئومۇمىي ئەھۋالى (A). CRISPR/Cas9 سىستېمىسىنىڭ تەركىبلىرى: (i). Cas9 ئېندونۇكلېئازا نىشان DNA تىزىملىكىنى كېسىشكە مەسئۇل، (ii) crRNA ۋە tra-crRNA خىمېرالىرىنىڭ بىرىكىشىدىن ھاسىل بولغان يەككە يېتەكلىگۈچ (sg) RNA. (ئىككى). Cas9 Rec I، Rec II، NUC لوبى (HNH ۋە Ruv C تارماق تەركىبلەر) ۋە PAM ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش رايونى (C) قاتارلىق ماس كېلىدىغان فۇنكسىيەلەرگە ئىگە بىر قانچە تەركىبلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. CRISPR/Cas9 ئاقسىل بىرىكمىسى DNA تىزىملىكىنى تولۇقلىمايدىغان ۋە تولۇقلىمايدىغان شەكىللەرگە بۆلىدۇ (D). CRISPR/Cas9 گېنومنى ئۈچ باسقۇچتا تەھرىرلەيدۇ: تونۇش، كېسىش ۋە رېمونت قىلىش. لايىھەلەنگەن sg-RNA Cas9 نى يېتەكلەيدۇ ۋە تولۇقلىغۇچ تەركىب crRNA ئارقىلىق ئېھتىياجلىق تىزىملىكنى تونۇيدۇ. Cas9 PAM تىزىملىكىنى 5′-NGG-3′ دا تونۇيدۇ ۋە DNA نى ئېرىتىپ، DNA-RNA ئارىلاشمىسىنى ھاسىل قىلىدۇ ۋە پارچىلىنىشنى ئاكتىپلاشتۇرىدۇ. Cas9 نىڭ HNH دائىرىسى تولۇقلىغۇچى زەنجىرنى، RuvC دائىرىسى تولۇقلىغۇچى بولمىغان زەنجىرنى پارچىلايدۇ. CRISPR/Cas9 ئىككى خىل ئۇسۇلدا پارچىلاش ئارقىلىق dsDNA نى رېمونت قىلىدۇ: گومولوگىيەلىك بولمىغان ئۇچلۇق ئۇلىنىش (NHEJ) ۋە گومولوگىيەگە قارىتىلغان رېمونت (HDR). NHEJ ئىككى زەنجىرلىك DNA نى يات گومولوگىيەلىك DNA بولمىغان ئەھۋالدا ئېنزىملىق جەريان ئارقىلىق رېمونت قىلىدۇ، بۇ خاتالىققا مايىل مېخانىزم تاسادىپىي DNA تىزىملىكىنى كىرگۈزەلەيدۇ ياكى چىقىرىۋېتىدۇ. HDR ئىنتايىن ئالاھىدە بولۇپ، گومولوگىيەلىك DNA قېلىپلىرىنى تەلەپ قىلىدۇ.
CRISPR/Cas9 ئارقىلىق رېمونت قىلىش يوللىرى گومولوگ بولمىغان ئۇچىنى بىرلەشتۈرۈش (NHEJ) ۋە گومولوگىيىلىك يۆنىلىشلىك رېمونت قىلىش (HDR) مېخانىزمىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. NHEJ خاتالىققا مايىل يول بولۇپ، ئۇ كىرگۈزۈش ياكى ئۆچۈرۈشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ھەمدە رېمونت قىلىش مېخانىزمى جەريانىدا ھېچقانداق ئەندىزە تەلەپ قىلمايدۇ. ئۇ ئۆلچەملىك ئاقسىللارنى ھاسىل قىلىش ئۈچۈن تاسادىپىي نۇكلېئوتىدلارنى ئىشلىتىدۇ (Abbasi قاتارلىقلار، 2021). بۇ رېمونت قىلىش سىستېمىسى KU بىرىكمىسى، ئۆزئارا تولۇقلايدىغان ئاقسىل بىرىكمىسى تىپى 4 (XRCC-4)، DNA ئۇچىنى بىر تەرەپ قىلىش ئېنزىم ۋە ئاقسىل كىنازا DNA-PKcs قاتارلىق تۆت بىرىكمىدىن تەركىب تاپقان (Abbasi قاتارلىقلار، 2021). KU مۇرەككەپ ئاقسىلىنىڭ ئىككى تارماق بۆلىكى بار، Ku 70 ۋە Ku 80، ھەمدە NHEJ مېخانىزمىدا مۇھىم رول ئوينايدۇ، چۈنكى رېمونت قىلىش مېخانىزمى ئىككى تارماق بۆلەكنىڭ (Ku 70 ۋە Ku 80) نىشان DNA نىڭ ئۇچسىز ياكى دېگۈدەك ئۇچسىز ئۇچىغا باغلىنىشى ئارقىلىق باشلىنىدۇ (Abbasi قاتارلىقلار، 2021)، بۇ NHEJ غا مۇناسىۋەتلىك باشقا ئامىللارنى يارىلىنىش ئورنىغا جەلپ قىلىش ئۈچۈن قۇرۇلما رولىنى ئوينايدۇ (Yang قاتارلىقلار، 2020). XRCC-4 ۋە DNA بىرىكمىسى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 334 ۋە 911 ئامىنو كىسلاتاسىدىن تەركىب تاپقان، XRCC4-DNA بىرىكمىسى IV بىرىكمىسى DNA ئۇچلىرىنىڭ باغلىنىشىنى قوزغىتىدۇ (Chatterjee قاتارلىقلار، 2015). DNA ئاخىرقى بىر تەرەپ قىلىش ئېنزىم، يەنە پولىننۇكلېئوتىد كىنازا 3′-فوسفات دەپمۇ ئاتىلىدۇ، بىر DNA ئاخىرقى بىر تەرەپ قىلىش ئېنزىم. ئۇ DSB رېمونت قىلىش جەريانىدا DNA دىكى 3′P گۇرۇپپىسىنى چىقىرىۋېتەلەيدۇ ۋە 5′OH گۇرۇپپىسىنى فوسفورلاشتۇرالايدۇ. ئۇ يەنە SSB رېمونت قىلىش يولى ئارقىلىق يەككە زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشلەرنى (SSB) رېمونت قىلىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ (Chatterjee قاتارلىقلار، 2015). ئاقسىل كىنازا DNA-PKcs بولسا DNA غا تايىنىدىغان ئاقسىل كىنازا بولۇپ، PIKK لارنىڭ كاتالىزاتورلۇق تارماق بىرلىكى (فوسفاتىدىلىنوزىتول 3-كىنازا بىلەن مۇناسىۋەتلىك كىنازالار) ۋە ئاتاكسىيە تېلاڭگىئېكتازىيە مۇتاتسىيەگە ئۇچرىغان (ATM) ئائىلىسىدىن، شۇنداقلا ATM ۋە Rad3 بىلەن مۇناسىۋەتلىك ATR لاردىن تەركىب تاپقان. زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشلەر (DSBs) ۋە يەككە زەنجىرلىك ئۈزۈلۈشلەر (Yue قاتارلىقلار، 2020؛ پېڭ قاتارلىقلار، 2016).
HDR تېخىمۇ توغرا ۋە ماس كېلىدىغان رېمونت قىلىش مېخانىزمى، چۈنكى ئۇچۇرلار گومولوگ DNA قوش ماددىسىنىڭ بۇزۇلمىغان شەكلى ئارقىلىق كۆچۈرۈلىدۇ، گەرچە ئۇ ئاچا-سىڭىل خروماتىدلارنىڭ بولۇشىنى تەلەپ قىلسىمۇ. بۇ سۈت ئەمگۈچىلەر ھۈجەيرە دەۋرىيلىكىنىڭ S/G2 باسقۇچىدا يۈز بېرىدۇ. HDR ئاساسلىقى ئېچىتقۇ تۈرلىرىدە يۈز بېرىدۇ، ئەمما NHEJ سۈت ئەمگۈچىلەردە ئىنتايىن مۇھىم (بۇرما قاتارلىقلار، 2006؛ ئابباسى قاتارلىقلار، 2021). تولۇق رېمونت قىلىش مېخانىزمى 1-رەسىمدە كۆرسىتىلدى.
TNBC گېن ۋە ئېپىگېنېتىك نورمالسىزلىقلاردىن كېلىپ چىققانلىقتىن، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق يامان سۈپەتلىك گېنوم/ئېپىگېنوم نورمالسىزلىقلىرىنى تۈزىتىش مۇۋاپىق داۋالاش ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن (Chen et al., 2019). بۇنىڭدىن باشقا، ھۈجەيرىگە خاس ترانسكرىپسىيەنى تەڭشەشكە قاتناشقان بەزى ترانسكرىپسىيە ئامىللىرى راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئۆزگىچە ئالاھىدىلىكلىرىنى نامايان قىلىشى مۇمكىن، بۇ ترانسكرىپسىيەنى تەڭشەش راكنى داۋالاشتا ئەلا ئۇسۇل بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Drost et al., 2017). دورا تەرەققىياتى ئۈچۈن ئۆسمىلەرنىڭ بۇ مولېكۇلا ئالاھىدىلىكلىرىنى، مەسىلەن گېن، ئېپىگېنېتىك ۋە ترانسكرىپسىيە نۇقسانلىرىنى ئىشلىتىش كلىنىكىلىق نەتىجىلەرنى ياخشىلاپ، تەكشۈرۈش تەننەرخىنى تۆۋەنلىتىدۇ. CRISPR راك پەيدا قىلىدىغان گېنوم نىشانلىرىنى بايقاپ ئېنىقلاپلا قالماي، يەنە ئىنسان ھۈجەيرىلىرىدىكى ئونكوگېنلارنى تەھرىرلەش، باستۇرۇش ۋە ئېپىگېنېتىك جەھەتتىن ئۆزگەرتىشكىمۇ ئىشلىتىلىدىغان گېن تەھرىرلەش قورالى (1-جەدۋەل) (Ahmed et al., 2021). ئۆسمە باستۇرغۇچىلار، ئونكوگېنلار ۋە دورىغا قارشى تۇرۇش بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېنلارنى ئىزدەش ئۈچۈن بىر قانچە CRISPR تەكشۈرۈشى ئېلىپ بېرىلدى. CRISPR/Cas9 نىڭ ھەر خىل TNBC ئونكوگېنلىرىنى تەھرىرلەشتە ئىشلىتىلىشى 2-رەسىمدە كۆرسىتىلدى.
2-رەسىم. CRISPR/Cas9 ئارقىلىق ھەر خىل TNBC ئونكوگېنلىرىنىڭ گېنىنى تەھرىرلەش ئارقىلىق راكنىڭ ئۆسۈشى ۋە مېتاستازىنىڭ ئازىيىشىغا ئېرىشكىلى بولىدۇ. بۇ ئونكوگېنلار CDK7، NAT1، UBR5، YTHDF2، ITGA9، CXCR4 ۋە CXCR7، Crypto1، ROR1 ۋە ST8SIA نى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ، بۇلار TNBC نىڭ پەيدا بولۇشى ۋە مېتاستازىغا قاتنىشىدۇ.
راك ھۈجەيرىسىنىڭ كۆچۈشى، تاجاۋۇز قىلىشى ۋە ئېپىتېلىي-مېزېنخىمال ئۆتكۈنچى (EMT) ITGA9 بىلەن مۇناسىۋەتلىك. ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا ITGA9 نىڭ Notch يولىدا مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقى ۋە رابدومىئوساركوما مېتاستازىدا قىزىقارلىق رول ئوينايدىغانلىقى كۆرسىتىلگەن (Molist et al., 2020). بۇنىڭدىن باشقا، ITGA9 نىڭ كۆكرەك راكى قاتارلىق بىر قانچە ئۆسمە تىپلىرىدىكى بىمارلارنىڭ كېسەللىك پراكتى بىلەن زىچ مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى بايقالغان (Wang Z. et al., 2019). بۇنىڭدىن باشقا، ITGA9 نىڭ بىئوئىنفورماتىك ئانالىزى ئۇنىڭ TNBC دىكى ئىپادىسىنىڭ باشقا كۆكرەك راكى تىپلىرىغا قارىغاندا كۆرۈنەرلىك يۇقىرى ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى. ITGA9 سەۋىيىسىنىڭ يۇقىرى بولۇشى TNBC بىمارلىرىدا ئۆسمە مېتاستازى ۋە قايتا قوزغىلىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. CRISPR/Cas9 تەرىپىدىن ITGA9 نىڭ يوقىتىلىشى راك ئاساسىي ھۈجەيرىسى (CSC) غا ئوخشاش خۇسۇسىيەتلەرنى، ئۆسمە قان تومۇر ھاسىل قىلىشىنى، ئۆسمە ئۆسۈشىنى ۋە TNBC دا β-كاتېنىننىڭ پارچىلىنىشىنى ئىلگىرى سۈرۈش ئارقىلىق مېتاستازنى تۆۋەنلىتىشنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (Wang Z. et al., 2019).
Crypto-1 TGF-β ئائىلىسىنىڭ ئەزاسى بولۇپ، دەسلەپكى ئېمبىرىئون ھاسىل بولۇش، ئاساسىي ھۈجەيرىنى ساقلاش ۋە راك مېتاستازى ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم (Ishii et al., 2021). يەنە Tdgf-1 دەپمۇ ئاتىلىدۇ، ئۇ راك پەيدا قىلغۇچى GPI غا باغلانغان سىگنال ئاقسىلى بولۇپ، دەسلەپكى سىزىق، مېزودېرما ۋە ئېندودېرما شەكىللىنىشىنى تەڭشەشكە، شۇنداقلا ئېمبىرىئون ھاسىل بولۇش جەريانىدا بەدەن ئەزالىرىنىڭ تەرەققىياتىدا سول/ئوڭ ئاسسىمېترىيەنىڭ شەكىللىنىشىگە قاتنىشىدۇ (Zhang et al., 2021b). بۇنىڭدىن باشقا، Cripto-1 نىڭ ئاساسىي ھۈجەيرە بەلگىسى سۈپىتىدە ئېپىتېلىي-مېزېنشىمال ئۆتكۈنچى (EMT) غا قاتنىشىدىغانلىقى ئىسپاتلاندى (Zhang et al., 2021b). EMT پەقەت ئېمبىرىئون تەرەققىياتى، فىبروز ۋە يارىنىڭ ساقىيىشى قاتارلىق ھەر خىل جەريانلار ئۈچۈنلا ئەمەس، بەلكى راكنىڭ تاجاۋۇز قىلىشى ۋە مېتاستازى ئۈچۈنمۇ مۇھىم. بۇنىڭدىن باشقا، Cripto-1 نىڭ تۆت خىل Notch رېتسېپتورى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقى ۋە ئۇلارنىڭ تەرجىمە جەريانىدىكى پىشىپ يېتىلىشىنى كۈچەيتىدىغانلىقى ئىسپاتلاندى (Brandstadter and Maillard, 2019). Notch سىگنال يولى ئىنسانلارنىڭ كۆكرەك راكى ھۈجەيرىلىرىنىڭ ساقلىنىشىغا قاتنىشىدىغانلىقى مەلۇم. تەتقىقاتلار CRISPR/Cas9 ئارقىلىق Crypto-1 نىڭ نوكاۋتى راكنىڭ ئۆسۈشى ۋە مېتاستازنى باستۇرىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى. شۇڭا، Crypto-1 TNBC نىڭ مۇھىم داۋالاش نىشانىغا ئايلىنىشى مۇمكىن (Castro et al., 2015).
XCL12 ئاقسىلى ۋە ئۇنىڭ خېموكىن رېتسېپتورى CXC (CXCR4 ۋە CXCR7) راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ كۆپىيىشى، ئۆسۈشى، كۆچۈشى ۋە تاجاۋۇزىدا ھەر خىل رول ئوينايدۇ (Wu قاتارلىقلار، 2015). بۇ خېمورېتسېپتورلار تىرىك جانلىق ۋە تىرىك جانلىق مودېللىرىدا كۆپ خىل سىگنال يوللىرى ئارقىلىق TNBC نىڭ تەرەققىياتى بىلەن مۇناسىۋەتلىك (Wu قاتارلىقلار، 2015). بۇنىڭدىن باشقا، CXCR4 ۋە CXCR7 نىڭ ئاكتىپلىنىشى TNBC دا مېتاستازغا بولغان سەزگۈرلۈكنىڭ يۇقىرى بولۇشى ۋە ناچار كېسەللىك ئالامىتى بىلەن مۇناسىۋەتلىك (Karn قاتارلىقلار، 2022). شۇڭلاشقا، CXCR4 ۋە CXCR7 نىڭ نوكاۋتى TNBC نى ئۆز ئىچىگە ئالغان كۆكرەك راكىنى داۋالاشتا ئۈنۈملۈك دورا نىشان گېنىغا ئايلىنىشى مۇمكىن. ياڭ قاتارلىقلارنىڭ تەتقىقاتى. ياڭ قاتارلىقلار (2019) CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىپ CXCR4 ۋە CXCR7 گېنلىرىنى بىرلىكتە نوكاۋت قىلدى ۋە TNBC نىڭ كۆپىيىشى، ئۆسۈشى، كۆچۈشى ۋە تاجاۋۇزىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە توسقۇنلۇققا ئۇچرىغانلىقىنى بايقىدى (Yang قاتارلىقلار، 2019).
كۆكرەك راكى توقۇلمىلىرىدا TNBC ئونكوگېنى بولغان miR-3662 نىڭ سەۋىيىسىنىڭ ئاشقانلىقى كۆزىتىلدى (Yi قاتارلىقلار، 2022). miR-3662 نىڭ تۆۋەنلىشى كۆكرەك راكى ئۆسمىسىنىڭ ئۆسۈشى ۋە مېتاستازلىنىشىنى تورمۇز ۋە سىناق نەيچىسىدە توسىدىغانلىقى ئىسپاتلاندى (Agarwal ۋە Gupta، 2021). HBP-1 Wnt/-catenin سىگنالىنىڭ كۈچلۈك توسقۇچىسى بولۇپ، TNBC ھۈجەيرىلىرىنىڭ miR-3662 ئارقىلىق ئۆسۈشىگە مەسئۇل بولۇشى مۇمكىن. يېقىندا، Yi قاتارلىقلار miR-3662-HBP1 ئوقىنىڭ TNBC ھۈجەيرىلىرىدىكى Wnt/-catenin سىگنال يولىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى بايقىدى (Yi قاتارلىقلار، 2022). ئۆسمىگە خاس ئىپادىسى سەۋەبىدىن، miR-3662 TNBC نىڭ داۋالاش نىشانى بولۇشى مۇمكىن. شۇڭا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق miR-3662 نىڭ تۆۋەنلىشى TNBC نى داۋالاش ئۈچۈن يېڭى دورىلارنى تەرەققىي قىلدۇرۇشنىڭ ئەلا ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن.
UBR5 300 kDa لىق نۇكلېئوفوسفوپروتېئىن بولۇپ، ھەر خىل راك كېسەللىكلىرىدە راك پەيدا بولۇش، مېتاستاز ۋە ئىممۇنىتېت ئىنكاسىنىڭ ئاساسلىق تەڭشىگۈچىسى دەپ قارالغان (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023). UBR5 نىڭ TNBC ئەۋرىشكىلىرىدە يۇقىرى دەرىجىدە تەڭشىلىنىدىغانلىقى ۋە ئۇبىكۇئىتىن لىگازا پائالىيىتى ئارقىلىق كۆپىيىشنى قوزغىتىش ئارقىلىق ERα فۇنكسىيەسىنى قوزغىتىدىغانلىقى خەۋەر قىلىنغان (Bolt et al., 2015). دەسلەپكى TNBC ئەۋرىشكىلىرىنىڭ پۈتۈن ئېكسوم تەرتىپلەش تەتقىقاتىدا UBR5 نىڭ ئىپادىلىنىشىنىڭ ئاشقانلىقى، بۇنىڭ TNBC نىڭ تەرەققىياتىدىكى رولىنى كۆرسىتىپ بېرىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. بۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق UBR5 نىڭ ئۆچۈرۈلۈشى تەجرىبە چاشقان مودېللىرىدا TNBC مېتاستازى ۋە ئۆسۈشىنىڭ زور دەرىجىدە چەكلىنىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى. ئۇنىڭدىن باشقا، ياۋا تىپتىكى چاشقان مودېلىغا UBR5 نى كىرگۈزۈش ئۇنىڭ تولۇق ئىقتىدارىنى ئەسلىگە كەلتۈردى، ئەمما بۇ تەسىر ئاكتىپسىزلاشتۇرۇلغان مۇتانت تۈرلىرىدە كۆزىتىلمىدى (Liao et al., 2017). UBR5 نىڭ كەمچىل بولۇشى TNBC دا ئاپپتوز، نېكروز ۋە راك كېسىلىنىڭ كۆپىيىشىنىڭ توسۇلۇشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك، چۈنكى قان تومۇرنىڭ ئاجىزلىشىشى سەۋەبىدىن. UBR5 نىڭ يوقىلىشى سەۋەبىدىن، راك كېسىلىنىڭ يىراق ئەزالارغا تارقىلىشى ئازىيىدۇ، ھەمدە UBR5 ئاساسلىقى E-كادھېرىن ئىپادىسىنى ئازايتىش ئارقىلىق نورمالسىز EMT نى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ (Zhang ۋە Weinberg, 2018). يېقىندا، UBR5 نىڭ E3 ئۇبىكۇئىتىناتسىيە پائالىيىتىنىڭ كەمچىل بولۇشى سەۋەبىدىن TNBC دا IFN-γ قوزغىغان PDL1 ترانسكرىپسىيەسىدە ئىنتايىن مۇھىم ئامىل ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى. RNA ترانسكرىپتوم ئانالىزى UBR5 نىڭ IFN-γ يولى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېنلارغا سىستېمىلىق تەسىر كۆرسىتىشى ۋە ئاقسىل كىنازا RNA (PKR) ۋە ئۇنىڭ سىگنال ئۆزگەرتكۈچلىرى ۋە ئاكتىپلاشتۇرغۇچلىرىنىڭ ئاكتىپلىنىش سەۋىيەسىنى ئاشۇرۇش ئارقىلىق PDL1 نىڭ ئاكتىپلىنىشىنى ئىلگىرى سۈرۈشى مۇمكىنلىكىنى ئاشكارىلىدى. ترانسكرىپسىيە 1 (STAT1) ۋە ئىنتېرفېرون تەڭشەش ئامىلى 1 (IRF1). قانداقلا بولمىسۇن، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق UBR5 ۋە PD-L1 ئىپادىسىنىڭ بىرلەشتۈرۈلگەن ئابلاتسىيەسى، يالغۇز توسۇش ئۇسۇلىغا قارىغاندا، بىرىكمە داۋالاش ئۈنۈمىگە ئىگە بولۇپ، ئۆسمە مىكرو مۇھىتىغا چوڭقۇر تەسىر كۆرسىتىدۇ (Wu قاتارلىقلار، 2022). شۇڭا، CRISPR/Cas9 UBR5 نىڭ ئىقتىدارىنى چەكلەش، شۇ ئارقىلىق TNBC مېتاستازى ۋە ئۆسمە ئۆسۈشىنى باستۇرۇشنىڭ مۇھىم قورالى بولۇشى مۇمكىن.
ROR1 راك ۋە ئېمبىرىئونال تەرەققىيات جەريانىدا ئىپادىلىنىدىغان I تىپلىق ترانسمېمبران ئاقسىلى بولۇپ، ئۇ تۇخۇمنىڭ ئونكوفېتال ئاقسىلى دەپ ئېنىقلانغان (Nicholas Borcherding, 2014). ھەر خىل ئىنسان راكلىرىنىڭ تاجاۋۇزچىلىق خاراكتېرى ROR1 نىڭ يۇقىرىلىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. ROR1 نى نىشان قىلغان داۋالاش بىرىكمىلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان تىرىك جانلىق ۋە تىرىك جانلىق تەتقىقاتلىرىدىن ئۈمىدۋار نەتىجىلەر قولغا كەلتۈرۈلدى (Chien et al., 2016). كۆكرەك توقۇلمىسى بىئوپسىيەسىدىكى ROR1 mRNA نىڭ يۇقىرى سەۋىيىسى يەنە ئاكتىپ بازالغا ئوخشاش كۆكرەك (BL) ئۆسمىسى ۋە ئۇلارنىڭ بەدەننىڭ باشقا قىسىملىرىغا كۆچۈشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. ئۇنىڭدىن باشقا، ROR1 نىڭ ئارتۇقچە ئىپادىلىنىشى TNBC نىڭ تەرەققىياتىنىڭ ئالدىن پەرەز قىلىش بەلگىسى دەپ ئېنىقلانغان (Chien et al., 2016). قانداقلا بولمىسۇن، TNBC نىڭ ئۆسۈشى ۋە مېتاستازنى باستۇرۇش ئۈچۈن CRISPR/Cas9 ئارقىلىق ROR1 نى جىمجىتلاش ئۈنۈملۈك ئىستراتېگىيە بولىدۇ.
سىئاللىنىش جەريانى سىئال كىسلاتاسىنى گلىكوكونجۇگاتلارغا قوشۇشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ، بۇ سىئال ترانسفېرازا (STs) تەرىپىدىن كاتالىزاتورلىنىدۇ. ST8SIA1 ST ئائىلىسىگە تەۋە بولۇپ، لىمفا ھۈجەيرىسى لېيكېمىيەسى ۋە تۈز ئۈچەي راكى قاتارلىق ھەر خىل كېسەللىكلەرنىڭ پاتوگېنىزىدا مۇھىم رول ئوينايدۇ (Chang قاتارلىقلار، 2018). RNA تەرتىپ ئانالىزى ST8SIA1 نىڭ TNBC بىمارلىرىنىڭ كۆكرەك توقۇلمىلىرىدا يۇقىرى دەرىجىدە ئىپادىلىنىدىغانلىقىنى ۋە ئۆسمە باستۇرغۇچى گېنى p53 دىكى مۇتاتسىيە بىلەن ئاكتىپ مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكىنى، بۇ TNBC نىڭ پاتوگېنىزىغا تۆھپە قوشۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Battula قاتارلىقلار، 2017). بۇنىڭدىن باشقا، ST8SIA1 TNBC نىڭ مېتاستازى ۋە قايتا پەيدا بولۇشىغا قاتنىشىدۇ، بۇ ئۇنىڭ TNBC نىڭ پەيدا بولۇشى ۋە تەرەققىياتىدا مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. TNBC نىڭ سىناق نەيچىسى مودېلىدا، CRIPSR/Cas9 تەرىپىدىن ST8SIA1 نىڭ يىقىتىلىشى ئۆسۈش ۋە مېتاستازنى توسىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى (Battula قاتارلىقلار، 2017). بۇ CRISPR/Cas9 نىڭ TNBC نى داۋالاشتا ST8SIA1 ئونكوگېنىنىڭ ئىقتىدارىنى چەكلەشتىكى مۇھىم قورال بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
NAT1 بولسا II باسقۇچلۇق كسېنوبىئوتىك بىرىكمىلەرنىڭ شەكىللىنىشىنى كاتالىزاتورلايدىغان ماددا ئالمىشىش ئېنزىم بولۇپ، دېگۈدەك بارلىق ئىنسان توقۇلمىلىرىدا ئىپادىلىنىدۇ. NAT1 ئاروماتىك ئامىن سۇبسترات بولمىغان ئەھۋال ئاستىدا، ئاتسېتىل-CoA (ئاتسېتىل-CoA) نى نىشان قىلىش ئۈچۈن كوفاكتور فولاتنى ئىشلىتەلەيدۇ (Stepp قاتارلىقلار، 2015؛ Laurieri قاتارلىقلار، 2014). تەتقىقاتلار NAT1 نىڭ كۆكرەك راكى ھۈجەيرىسى مودېللىرىدىكى ماترىكسا مېتاللوپروتېئىناز 9 (MMP9) نىڭ ئىقتىدارىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى ۋە گىليۇكوزا ئاچلىقى مەزگىلىدە ئاكتىپ ئوكسىگېن تۈرلىرىدىن (ROS) ساقلايدىغانلىقىنى كۆرسەتتى (Wang قاتارلىقلار، 2018). NAT1 نى ئۆچۈرۈشنىڭ پىرۇۋات دېھىدروگېناز بىرىكمىسىنى توسۇپ، مىتوخوندىرىيە ئىقتىدارىنىڭ قالايمىقانلىشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى (Wang L. قاتارلىقلار، 2019). بۇنىڭدىن باشقا، باشقا ھەر خىل دوكلاتلاردا كىچىك مولېكۇلا ۋە siRNA نىڭ جىمجىتلىقى ئارقىلىق NAT1 نى توسۇش كۆكرەك راكى ھۈجەيرىلىرىنىڭ تاجاۋۇزچىلىقى ۋە كۆپىيىشىنى ئازايتالايدىغانلىقى كۆرسىتىلدى (Stepp قاتارلىقلار، 2018). يېقىندا، CRISPR/Cas9 سۈت بېزى راكى ھۈجەيرە لىنىيىسى MDA-MB-231 دىكى NAT1 نى باستۇرۇش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى، بۇ ئۇنىڭ ئىپادىلىنىش دەرىجىسىگە ئاساسەن ھۈجەيرە ماددا ئالمىشىشىغا تەسىر كۆرسىتىدۇ. بۇ تەتقىقات يەنە NAT-1 نىڭ TNBC نىڭ ئىلگىرىلىشى ۋە مېتاستازى ئۈچۈن مۇھىم ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى (Carlisle et al., 2020).
ئونكوگېنلارنىڭ ماسلاشتۇرۇلغان ترانسكرىپسىيەسى يۇقىرى كۈچەيتكۈچلەر، ترانسكرىپسىيە ئامىللىرى ۋە بىرلىكتە ئىشلەيدىغان ئامىللار تەرىپىدىن تەڭشىلىنىدۇ (Hnisz قاتارلىقلار، 2015). بۇنىڭدىن باشقا، ترانسكرىپسىيەنى تەڭشەش ئۈچۈن CDK7، CDK8، CDK9، CDK12 ۋە CDK13 قاتارلىق بىر گۇرۇپپا سىكلىنغا تايىنىدىغان كىنازا (CDK) تەلەپ قىلىنىدۇ. بۇلارنىڭ ئىچىدە، CDK7 RNA پولىمېرازا II نىڭ فوسفورلىنىشىغا قاتنىشىدۇ، بۇ TNBC نىڭ پاتوگېنىدا ئونكوگېن ترانسكرىپسىيەسىنىڭ باشلىنىشى ۋە كېڭىيىشى ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم. مۇھىم بىر تەتقىقاتتا، CRISPR/Cas9 تەرىپىدىن CDK7 نىڭ ئۆچۈرۈلۈشى TNBC نى چەكلىدى، بۇ TNBC نىڭ پاتوگېنىنىڭ CDK7 غا تايىنىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Wang Y. قاتارلىقلار، 2015).
تەتقىقاتلار MYC ۋە RBP (RNA باغلىنىش ئاقسىلى) دىكى مۇتاتسىيەنىڭ ئاپپتوزغا ئېلىپ كېلىدىغانلىقىنى، MYC ياكى RBP دىكى يەككە گېن مۇتاتسىيەسىنىڭ راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئۆسۈشىگە تەسىر كۆرسەتمەيدىغانلىقىنى كۆرسەتتى (Einstein قاتارلىقلار، 2021). ئىنسان گېنومىدىكى 1000 دىن ئارتۇق RBP CRISPR/Cas9 ئاساسلىق كۈتۈپخانا ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى. بۇلارنىڭ ئىچىدە، 57 RBP نىڭ MYC سەۋىيىسى يۇقىرى بولغان راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئۆسۈشى ئۈچۈن مۇھىم ئىكەنلىكى بايقالدى (Wheeler قاتارلىقلار، 2020). بۇنىڭدىن باشقا، YTHDF2 TNBC ھۈجەيرىسىنىڭ ئۆسۈشىنى ساقلاشتا مۇھىم بولۇپ، MYC ئىپادىسى يۇقىرى بولغان راك ھۈجەيرىلىرىدە يۇقىرى سەۋىيەلىك كۆچۈرۈش ۋە تەرجىمە جەريانىدا مېتىللانغان كۆچۈرۈش مىقدارىنى ئازايتىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، YTHDF2 راك ھۈجەيرىلىرى ئۈچۈن مۇھىم ئەمەس، چۈنكى ئۇلار TNBC بىمارلىرىنىڭ ياشاش مۇددىتىنى ئۇزارتىش ئۈچۈن MYC سەۋىيىسىنىڭ يۇقىرى بولۇشىغا ئانچە تايىنمايدۇ (Einstein قاتارلىقلار، 2021)، بۇ ئۇنىڭ TNBC نى يېڭىپ چىقالايدىغان دورىلارنىڭ داۋالاش نىشانى بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
سىنىك بارماق ئاقسىلى (ZNF) ئىنسان گېنومىنىڭ تەخمىنەن %1 نى ئىگىلەيدۇ. تەتقىقاتلار ZNF نىڭ جىگەر راكى، كۆكرەك راكى ۋە تۈز ئۈچەي راكى قاتارلىق ھەر خىل راك كېسەللىكلىرىدىكى ھۈجەيرە كۆپىيىشىنى تەڭشىيەلەيدىغانلىقىنى كۆرسەتتى (Zhang W. قاتارلىقلار، 2021؛ Li قاتارلىقلار، 2017). CRISPR نىڭ نوكاۋتى ئارقىلىق ھاسىل قىلىنغان كۇتۇپخانىلار كۆكرەك راكى ھۈجەيرىلىرىدىكى ھەر خىل ئۆسمە باستۇرغۇچى گېنلارنى (TSG) تەكشۈرۈشتە ئىشلىتىلدى (Shalem قاتارلىقلار، 2014). شۇنىڭدىن كېيىن، CRISPR/Cas9 ZNF319 تەرىپىدىن ئۆچۈرۈلگەن كۆكرەك راكى ھۈجەيرىلىرىنىڭ ترانسكرىپتومىك تەتقىقاتى ZNF319 نىڭ كۆكرەك راكىنىڭ كۆپىيىشىنى ئازايتىدىغان ئۆسمە باستۇرغۇچى گېنى ئىكەنلىكىنى ۋە شۇڭا ھەر خىل سىگنال مېخانىزمى ۋە باشقا بىئولوگىيىلىك فۇنكسىيەلەرگە قاتنىشىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى (Wang L. قاتارلىقلار، 2022).
فېرروپتوز تۆمۈرنىڭ بولۇشىغا تايىنىدىغان بىر خىل پروگراممىلانغان ھۈجەيرە ئۆلۈمى. فېرروپتوزنىڭ تەرەققىياتىغا لىپىد پېروكسىدلىرىنىڭ بولۇشى تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقى مەلۇم. بۇنىڭدىن باشقا، PKCβII نىڭ بالدۇر لىپىد پېروكسىدلىنىشىنى كۆرسىتىدىغانلىقى، لىپىد پېروكسىدلىنىشىنىڭ ئېشىشىنىڭ فېرروپتوز بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى خەۋەر قىلىنغان. CRISPR/Cas9 ئارقىلىق باشقۇرۇلىدىغان كىنازا چەكلىگۈچىلىرىنىڭ كۇتۇپخانىسىنى تەكشۈرۈش ئارقىلىق، PKCβII نىڭ لىپىد پېروكسىدلىنىشى جەريانىغا قاتنىشىدىغانلىقى، بۇ MDA-MB-231 ھۈجەيرىلىرىدىكى فېرروپتوز ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم ئىكەنلىكى ئاشكارىلاندى (Zhang et al., 2022). شۇڭا، بۇ CRISPR/Cas9 تەرىپىدىن PKCβII نى يوقىتىش فېرروپتوزغا مۇناسىۋەتلىك كېسەللىكلەرنى داۋالاشتا راك باستۇرۇش گېنىنىڭ نىشانى بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Zhang et al., 2022).
دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىش راك كېسىلى بىمارلىرىنىڭ تەخمىنەن %90 ئۆلۈمىنىڭ سەۋەبى دەپ قارىلىدۇ، بۇ راك كېسىلىنى داۋالاشتىكى ئاساسلىق خىرىسلارنىڭ بىرى (Bukowski قاتارلىقلار، 2020). نەتىجىلەر شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، دورا ئېقىشى، DNA رېمونتى، ئاپپتوز ۋە ھەر خىل ھۈجەيرە سىگنال يوللىرىغا مۇناسىۋەتلىك يېتەرلىك مىقداردىكى گېنلار دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك (Haider قاتارلىقلار، 2020). بۇلارنىڭ ئىچىدە، بىر قانچە گېن CRISPR/Cas9 قوراللىرى تەرىپىدىن نىشان قىلىنغان بولۇپ، دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىشنى ئازايتىش ۋە راكقا قارشى داۋالاشنىڭ ئۈنۈمىنى ئاشۇرۇشتا ئۈمىدۋار نەتىجىلەرنى قولغا كەلتۈرگەن (Vaghari-Tabari قاتارلىقلار، 2022). بۇنىڭدىن باشقا، يۇقىرى ئۈنۈملۈك CRISPR/Cas9 گېنىنى يوقىتىش تەكشۈرۈش كۇتۇپخانىلىرى دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىش گېنىنىڭ نىشانلىرىنىڭ ئىقتىدارىنى ئۆزگەرتىشتە رول ئوينايدۇ (Shalem قاتارلىقلار، 2015). پاكلىتاكسېلغا قارشىلىق كۆرسىتىش گېنلىرىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن، RNA تەرتىپلەش ۋە گېنوم دائىرىسىدىكى sgRNA كۈتۈپخانىسىنى تەكشۈرۈش ئارقىلىق، قايتا-قايتا TNBC كېسىلىگە گىرىپتار بولغان بىمارلاردا دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولغان گىستون دېئاتسېتىلازا 9 (HDAC9) قاتارلىق سەككىز كاندىدات گېننى ئېنىقلاشقا ئىشلىتىلدى (B قاتارلىقلار، 2020). يەنە بىر تەتقىقاتتا، راكقا قارشى دورىلار بىلەن داۋالانغان TNBC بىمارلىرىنىڭ ھايات قېلىش مەزگىلىدە دىسېرىن/ترېئونىن ۋە تىروزىن ئاقسىل كىنازا (DSTYK) نىڭ ئىپادىلىنىشىنىڭ ئاشقانلىقى كۆزىتىلدى. ئۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق DSTYK نىڭ يىقىتىلىشى سىناق نەيچىسىدە دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىش راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ (SUM102PT ھۈجەيرىلىرى ۋە MDA-MB-468 ھۈجەيرىلىرى) ۋە تىرىك جانلىق TNBC مودېلىنىڭ ئاپپتوزىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە كۈچەيتتى (Ogbu قاتارلىقلار، 2021).
TNBC نىڭ MAPK يولى نورمالسىز ئاكتىپلانغان بولسىمۇ، MEK نىشانلىق داۋالاش ئۇسۇللىرىنىڭ كلىنىكىلىق ئۈنۈمى ناچار. CRISPR/Cas9 گېنوم كۈتۈپخانىسى تەكشۈرۈشىدە PSMG2 (پروتېئوم يىغىلىش چاپېرونى 2) نىڭ چەكلىنىشى TNBC BT549 ۋە MB468 ھۈجەيرىلىرىنى MEK چەكلىگۈچىسى AZD6244 گە سەزگۈرلەشتۈرىدىغانلىقى ئاشكارىلاندى. PSMG2 نىڭ CRISPR/Cas9 نى يوقىتىشى نورمال پروتېئازوم ئىقتىدارىنى ئۆزگەرتىپ، PDPK1 نىڭ ئاپتوفاگىيە ئارقىلىق پارچىلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى، شۇنىڭ بىلەن AZD6244 (MEK چەكلىگۈچىسى) ۋە MG132 (پروتېئازوم چەكلىگۈچىسى) تەرىپىدىن قوزغىتىلغان TNBC چاشقان مودېللىرىدىكى ئۆسمە ھۈجەيرىلىرىنى تېخىمۇ ياخشىلىدى. شۇڭا، پروتېئازوم ۋە MAP كىنازا (MEK) چەكلىگۈچىلىرىنى بىرلىكتە ئىشلىتىپ، ئۆسمە ھۈجەيرىلىرىنىڭ كۆپىيىشىنى ئازايتقىلى بولىدۇ (Wang X. قاتارلىقلار، 2022).
CRISPR/Cas9 يەنە TNBC غا قارشىلىق كۆرسىتىش گېنىنىڭ يوقىلىشىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈنمۇ ئىشلىتىلگەن (شۇ قاتارلىقلار، 2020). گې قاتارلىقلار TNBC دا BET برومودومىن چەكلىگۈچىسى (BBDI) JQ1 بىلەن داۋالانغان راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ دورىغا قارشىلىق كۆرسىتىش مېخانىزمىنى چۈشەندۈردى. CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىپ، ئۇلار rb1 گېنىنى ئۆچۈرۈش TNBC نىڭ راكقا قارشى دورىسى JQ1 غا قارشىلىق كۆرسىتىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى بايقىدى. شۇڭا، rb1 نىڭ ئىقتىدارى TNBC دا JQ1 دورىلىرىغا بولغان ئىنكاستا مۇھىم رول ئوينايدۇ. ئۇلار يەنە پاكلىتاكسېلنىڭ CDK4/6 كىنازا/مىكرو تۇرۇبا چەكلىگۈچىسى ئىكەنلىكىنى، ئۇنىڭ JQ1 قاتارلىق BBDI لار بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈشى دورىغا قارشىلىق كۆرسىتىدىغان TNBC غا ئۈمىدۋار داۋالاش ئىنكاسى بېرىشى مۇمكىنلىكىنى دوكلات قىلدى (Ge قاتارلىقلار، 2020).
ئۇزۇن كودلىمايدىغان RNA (lncRNA) نىڭ ترانسكرىپسىيە مەنزىرىسى TNBC دا يېڭى ياردەمچى داۋالاشقا قارشى تۇرۇشقا مەسئۇل ئىكەنلىكى دوكلات قىلىنغان. بۇ تەتقىقاتتا بەش خىل MALAT1 lncRNA ترانسكرىپسىيەسىنىڭ TNBC دا يۇقىرى ئىپادىلىنىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. بۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق MALAT1 نىڭ ئۆچۈرۈلۈشى TNBC BT-549 ھۈجەيرىلىرىنىڭ پاكلىتاكسېل ۋە دوكسورۇبىتسىنغا بولغان سەزگۈرلۈكىنى ئاشۇردى، بۇ TNBC دا MALAT1 غا قارشى تۇرۇشنىڭ مۇمكىن بولغان رولىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Shaath et al., 2021).
BRCA1 (BRCA1m) دىكى مۇتاتسىيەلەر كۆپ خىل بولۇپ، شۇڭا بايقاش تەس. BRCA1 نىڭ سۈنئىي ئۆلۈمگە ئېلىپ بارىدىغان ھەمراھى بولغان PARP1 (پولى(ADP-رىبوزا) پولىمېرازا) نى نىشان قىلىش TNBC دورىسىنىڭ خىمىيىلىك سەزگۈرلۈكىنى ئاشۇرۇشى مۇمكىن. CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىپ، PARP1 نى ئۆچۈرۈش دوكسورۇبىتسىن، گېمسىتابىن ۋە دوسېتاكسېل قاتارلىق راكقا قارشى دورىلارنىڭ mBRCA1 مۇتانت TNBC ھۈجەيرىلىرىگە بولغان سەزگۈرلۈكىنى ئاشۇردى، بۇ PARP1 نىڭ TNBC دىكى دورىغا قارشى تۇرۇش ئىقتىدارىغىمۇ قاتنىشىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Vaghari-Tabari قاتارلىقلار، 2022). . راك باستۇرغۇچى گېن BRCA1 ياكى BRCA2 دىكى مۇتاتسىيەلەر كىشىلەردە كۆكرەك راكىغا گىرىپتار بولۇش ئېھتىماللىقىنى ئاشۇرىدىغانلىقى مەلۇم. بۇ بىمارلارنى داۋالاش ئۈچۈن PARP چەكلىگۈچىلىرىنى ئىشلىتىش كېرەك. بۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق نۇكلېئوتىدنى قۇتقۇزۇش ئامىلى DNPH1 نى يوقىتىش زەھەرلىك نۇكلېئوتىد 5-گىدروكسىمېتىلدېئوكسۇرىدىن (hmdU) مونوفوسفاتنى چىقىرىۋېتەلەيدىغانلىقى، شۇنىڭ بىلەن BRCA كەمچىل ھۈجەيرىلەرنىڭ PARP چەكلىگۈچىلىرىگە سەزگۈرلۈكىگە بولغان ئىنكاسىنى كۈچەيتىدىغانلىقى ئىسپاتلاندى (Fugger). قاتارلىقلار، 2021). شۇڭا، CRISPR/Cas9 ۋە PARP1 چەكلىگۈچىلىرى TNBC نى داۋالاشتا مۇھىم ئىستراتېگىيەگە ئايلىنىشى مۇمكىن.
سىڭىپ كىرىدىغان گلىكوپروتېئىن (P-gp) گېنى كۆپ خىل دورىغا قارشى تۇرۇش گېنى بولۇپ، ئادەتتە بارلىق TNBC نىڭ تەخمىنەن %41 ىدە ئېشىپ كېتىدۇ (Sun قاتارلىقلار، 2020). P-gp قوزغىغان دورىنىڭ سىرتقا چىقىشى كۆكرەك راكىدىكى دورىغا قارشى تۇرۇشنىڭ ئاساسلىق تەڭشىگۈچىسى دەپ قارالغان. P-gp چەكلىگۈچىلىرى كۆكرەك راكىدىكى راكقا قارشى تۇرۇش دورىلىرىغا بولغان سەزگۈرلۈكنىڭ ئاشقانلىقىنى كۆرسەتتى (Famta قاتارلىقلار، 2021). شۇڭا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق P-gp ۋە P-gp چەكلىگۈچىلىرىنى يوقىتىش ياكى باستۇرۇش TNBC دىكى دورىغا قارشى تۇرۇشنى يېڭىشنىڭ ئىنتايىن مۇھىم ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن.
ATP باغلىنىشلىق كاسسىتا توشۇغۇچى G2 (ABCG2) نىڭ TNBC دا دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىشى مەلۇم (Palasuberniam قاتارلىقلار، 2015)، گەرچە ھازىر CRISPR/Cas9 بىلەن ABCG2 نىڭ جىمجىتلىقى بىلەن ئۆسمە باستۇرغۇچى گېنىنىڭ ئاكتىپسىزلىنىشى ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەت توغرىسىدا ھېچقانداق دوكلات يوق بولسىمۇ. PTEN ABCG2 نىڭ ئاكتىپلىنىشىنى كۈچەيتىشى مۇمكىن (Palasuberniam قاتارلىقلار، 2015)، (Deepak Singh قاتارلىقلار، 2021). شۇڭا، CRISP/Ca9 نى ئىشلىتىپ ABCG2 نى چىقىرىۋېتىش ۋە ئۇنى ABCG2 چەكلىگۈچىسى بىلەن بىرلەشتۈرۈش TNBC دا دوراغا قارشىلىق كۆرسىتىشنى يېڭىش ئۈچۈن مۇۋاپىق داۋالاش ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن. 2-جەدۋەلدە CRISPR/Cas9 نىڭ بارلىق قارشىلىق كۆرسىتىش گېنلىرىنى نىشان قىلغانلىقى تىلغا ئېلىنغان.
2-جەدۋەل. CRISPR/Cas9 ھۈجەيرىلەرنى راكقا قارشى دورىلارغا سەزگۈرلەشتۈرۈش ئۈچۈن ھەر خىل TNBC قارشىلىق كۆرسىتىش گېنلىرىنى نىشان قىلىدۇ.
CRISPR/Cas9 كۈتۈپخانىلىرى راك كېسىلىنىڭ پاتوگېنىزى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېن مۇتاتسىيەسىنى تەكشۈرۈشتىكى يوشۇرۇن قوراللار (Chan قاتارلىقلار، 2022). بۇ تەكشۈرۈش ئۇسۇلى (a) كۈتۈپخانا قۇرۇش، (b) لېنتىۋىرۇس ئۆتكۈزۈش، (c) فېنوتىپلىق تەكشۈرۈش ۋە (d) نىشان گېن ئانالىزى قاتارلىق تۆت باسقۇچنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. TNBC دا MAPK يولى نورمالسىز ئاكتىپلىنىشقا ئىگە بولسىمۇ، PTEN، RB1 ۋە TP53 قاتارلىق ئۆسمە باستۇرغۇچى گېنلاردا مۇتاتسىيە ئېلىپ يۈرگەن TNBC بىمارلىرىغا MEK نىشانلىق داۋالاشنىڭ كلىنىكىلىق مۆلچىرى ناھايىتى ناچار.
بۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىپ ئېلىپ بېرىلغان گېننى نوكاۋت قىلىش تەكشۈرۈشىدە، گۋاتېمالا گۈل ۋە يوپۇرماق ئېكىستراكتىدا مول بولغان ئەڭ كۈچلۈك ۋە تاللاشچان مولېكۇلا بولغان دېھىدروكاترول سىناق قىلىندى. بۇ مولېكۇلا دېھىدروكاترولنىڭ MDA-MB-231 گە بولغان تەسىرىنى چۈشىنىش ئۈچۈن سىناق قىلىندى. تاللاشچان ھۈجەيرە سىتوتوكسىدلىق مېخانىزمى. TNBC تارماق تىپلىرىنىڭ مېزېنخىما غول خۇسۇسىيىتى. بۇ CRISPR/Cas9 ئاساسلىق تەكشۈرۈشتە يەنە 17β-گىدروكسىستېروئىد دېھىدروگېنازا 11-تىپنى كودلايدىغان گېن HSD17B11 نىڭ MDA-MB-231 ھۈجەيرىلىرىدە يۇقىرى ئىپادىلىنىدىغانلىقى ۋە MDA-MB-231 ھۈجەيرىلىرىگە خاس دېھىدروفالكارىنولنى ھاسىل قىلىدىغانلىقى ئاشكارىلاندى (Grant قاتارلىقلار، 2020). شۇڭا، بۇ CRISPR/Cas9 گېنوم تەكشۈرۈشىنىڭ تەبىئىي بىرىكمىلەرنىڭ راكقا قارشى تۇرۇش خۇسۇسىيىتىنىڭ ئاساسىي مېخانىزمىنى ئېنىقلاشتا زور پوتېنسىيالغا ئىگە ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بۇنىڭدىن باشقا، TNBC نىڭ راكقا بولغان ئاجىزلىقى جانلىقلار ئۈچۈن CRISPR/Cas9 تەكشۈرۈش ئارقىلىق تەتقىق قىلىندى، بۇ تەكشۈرۈشتە راك پەيدا قىلىش ۋە راكنى باستۇرۇش يوللىرى ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەت كۆرسىتىلدى. mTOR ۋە Hippo يوللىرىنىڭ ئاساسلىق تەركىبلىرى TNBC دا راكنى تەڭشەشتە مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقى دوكلات قىلىندى. بۇنىڭدىن باشقا، تەتقىقاتلاردا mTORC1/2 ۋە YAP ئونكوپروتېئىننىڭ فارماكولوگىيىلىك چەكلىنىشىنىڭ جانلىقلار ئۈچۈن دورا ماترىتسىسى بىرىكمە مودېلى ۋە جانلىقلار ئۈچۈن بىمارلاردىن ئېلىنغان xenogranstalt ئارقىلىق TNBC نىڭ كېسەللىك پەيدا قىلىش ئىقتىدارىنى ئۈنۈملۈك چەكلەيدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. ئۇنىڭدىن باشقا، تورىن-1 ئارقىلىق mTORC1/2 چەكلىنىشى ماكروپىنوسىتوزنى كۈچەيتىدۇ، ۋېرتېپورفىن تەرىپىدىن قوزغىتىلغان YAP چەكلىنىشى TNBC ھۈجەيرىسىنىڭ ئۆلۈمىگە ئېلىپ كېلىدۇ. بۇ نەتىجىلەر بىرلىكتە TNBC نى داۋالاشنىڭ يېڭى ۋە ئۈنۈملۈك ئۇسۇللىرىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن جانلىقلار ئۈچۈن CRISPR تەكشۈرۈشىنىڭ كۈچى ۋە كۈچلۈكلۈكىنى نامايان قىلىدۇ (Dai et al., 2021).
ئىممۇنىتېت سىستېمىسىنىڭ قالايمىقانلىشىشى راك پەيدا بولۇشنىڭ مۇھىم ئامىلى. راك ھۈجەيرىلىرى راك مىكرو مۇھىتىدىكى ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىلىرىنىڭ پائالىيىتىگە توسقۇنلۇق قىلىش ۋە ئىممۇنىتېت سىستېمىسىغا زىيان يەتكۈزۈش قاتارلىق مۇداپىئە مېخانىزمىنى ئايلىنىپ ئۆتۈپ، ئىممۇنىتېت تازىلاش ئىقتىدارىدىن قۇتۇلىدۇ. شۇڭا، ئىممۇنىتېت سىستېمىسىنى ياخشىلاش ئۆسمىلەرگە قارشى تۇرۇشنىڭ ئاساسلىق ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن. CRISPR/Cas9 ئاساسلىق گېن ئۆزگەرتىشنى ئىشلىتىش ئىممۇنىتېت ئىقتىدارىنىڭ قالايمىقانلىشىشىغا مۇناسىۋەتلىك بىر قانچە مەسىلىنى ھەر خىل نۇقتىدىن ھەل قىلىدۇ. CRISPR/Cas9 تۆۋەندىكى يوللار ئارقىلىق كۆكرەك راكىغا قارشى ئۆسمىگە قارشى ئىممۇنىتېت كۈچىنى ياخشىلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن (3-رەسىم).
3-رەسىم. CRISPR/Cas9 ئىممۇنىتېت داۋالاش ئۇسۇلى TNBC ھۈجەيرىلىرىنى نىشان قىلىدۇ. CDK5 نىڭ يوقىلىشى ۋە PDL1 ۋە CD155 نىڭ يوقىلىشى ئىممۇنىتېت سىستېمىسىنى كۈچەيتىدۇ. شۇنىڭغا ئوخشاش، A2AR نىڭ يوقىلىشى ۋە HER2، mucin 1 ۋە TEM8 قاتارلىق TAA لارنىڭ يوقىلىشى CAR-T ھۈجەيرىلىرىنىڭ راك ھۈجەيرىلىرىنى ئۆلتۈرۈشتىكى ئۈنۈمىنى ئاشۇردى. CRISPR/Cas9 ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلغان T ھۈجەيرىسىنى تەكشۈرۈشتە، p38 كىنازانىڭ بۇزۇلۇشى T ھۈجەيرىسىنىڭ راكقا قارشى تۇرۇش پائالىيىتىنى كۈچەيتىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. CRISPR/Cas9 تەرىپىدىن ئۆزگەرتىلگەن T ھۈجەيرىلىرى TCR (T ھۈجەيرىسى رېتسېپتورى) نىڭ ئىپادىلىنىشىنى ئاشۇرىدۇ، نەتىجىدە T ھۈجەيرىلىرى راكقا قارشى تۇرۇش پائالىيىتىگە ئىگە بولىدۇ.
ئىممۇنىتېت داۋالاشنىڭ مەقسىتى ئىممۇنىتېت سىستېمىسىنى راك ھۈجەيرىلىرىگە ھۇجۇم قىلىشقا قوزغىتىشتىن ئىبارەت. ئىممۇنىتېت تەكشۈرۈش نۇقتىسى ئاقسىللىرىنىڭ ئارتۇقچە ئىپادىلىنىشى ئادەتتە ئۆزلۈكسىز ئىممۇنىتېت رېئاكسىيەسىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ، ئەمما راكنىڭ ئالدىنى ئېلىشقا ياردەم بېرىشى مۇمكىن (Topalian قاتارلىقلار، 2015). بۇ ئاقسىللار ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىلىرىنىڭ يۈزىدىكى رېتسېپتورلارغا باغلىنىش ئارقىلىق ئىممۇنىتېت رېئاكسىيەسىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ. كۆپ خىل تەكشۈرۈش ئاقسىللىرى (CD155 ۋە PD-L1 قاتارلىق) ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىلىرىدىكى PD-1 رېتسېپتورىنى نىشان قىلىدۇ ۋە كۆكرەك راكىدا، بولۇپمۇ TNBC دا ئىپادىلىنىدۇ (Li Y.-C. قاتارلىقلار، 2020). CRISPR/Cas9 ئارقىلىق PD-L1 ياكى ئۇنىڭ رېتسېپتورىنى يوقىتىش ئىممۇنىتېت سىستېمىسىنى TNBC ئۆسمىلىرىگە ھۇجۇم قىلىشقا قوزغىتىشى مۇمكىن (Yahata قاتارلىقلار، 2019). بۇنىڭدىن باشقا، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق CDK5 نى ئۆچۈرۈش ئارقىلىق PD-L1 ئىپادىسىنى تۆۋەنلىتىشنىڭ سىناق نەيچىسىدە ۋە تىرىك جانلىقتا ئۆسمە ئۆسۈشىنى توسىدىغانلىقى ئىسپاتلاندى (Deng قاتارلىقلار، 2020). كۆكرەك راكىنىڭ سىناق نەيچىسى ۋە سىناق نەيچىسى مودېللىرىدىكى ئۆسۈشنى چەكلەش، shRNA ئارقىلىق CD155 نىڭ ئازايتىلىشىنىڭ كۆكرەك راكىغا داۋالاش ئۈنۈمى بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Gao et al., 2018).
CAR T ھۈجەيرىلىرى راك بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئانتىگېنلارنى (TAA) تونۇيدىغان ۋە تەكشۈرۈش ئاقسىللىرىنى يوقىتىش ئارقىلىق ئۇلارنىڭ پائالىيىتىنى كۈچەيتەلەيدىغان CAR لارنى ئىپادىلەيدۇ (Li C. قاتارلىقلار، 2020). كۆكرەك راكىنى داۋالاشتا CAR T ھۈجەيرىسىنى داۋالاشنىڭ ھەر خىل نىشانلىرى بار، بۇنىڭ ئىچىدە HER2، mucin1 ۋە TEM8 قاتارلىق بىر قانچە TAA بار (Bajgain قاتارلىقلار، 2018). مېزوتېلىننى نىشان قىلغان CAR T ھۈجەيرىلىرىنىڭ (TNBC BT-459 ھۈجەيرىلىرىدە ئارتۇقچە ئىپادىلەنگەن) CRISPR/Cas9 ئارقىلىق PD-1 يوقىتىلغاندا راكقا قارشى تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ئىكەنلىكىگە دائىر دەلىللەر بار (Hu قاتارلىقلار، 2019). قانداقلا بولمىسۇن، بىمارلاردىن T ھۈجەيرىلىرىنى ئايرىپ، ئاندىن ئۇلارنى جانلىق ھالەتتە تەھرىرلەش ئەمگەك ۋە ۋاقىت تەلەپ قىلىدىغان جەريان. ئۇنىۋېرسال T ھۈجەيرىلىرى ئايرىش تەلىپىنى ئازايتالايدىغان بولسىمۇ، ئىنسان لېيكوتسىت ئانتىگېنى (HLA) I سىنىپ ۋە T ھۈجەيرە قوبۇللىغۇچىسىنى (TCR) ئىپادىلەيدىغان ئىئانە قىلغۇچى T ھۈجەيرىلىرى كۆچۈرۈلگەن تۇخۇمغا قارشى ساھىبخانىنىڭ نورمالسىزلىقىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن چىقىرىۋېتىلىشى كېرەك (Ren قاتارلىقلار، 2017). ، 2017a). CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىپ، HDR بىرلا ۋاقىتتا TCR ۋە HLA نى يوقىتىپ، CAR نى كودلايدىغان گېننى يوقىتالايدۇ. تەتقىقاتلار CRISPR/Cas9 نىڭ TCR ئورنىغا CD19 غا قارشى CAR لارنى كىرگۈزۈشكە ئىشلىتىلىدىغانلىقىنى، بۇنىڭ بىلەن T ھۈجەيرىلىرىنى يوقاتماي CAR لارنى ئۈنۈملۈك ئىشلەپچىقىرىشقا بولىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى (Dimitri قاتارلىقلار، 2022). كۆپ ئىقتىدارلىق تېخنىكىلار TCR، beta-2-مىكروگلوبۇلىن (B2M)، HLA-I تارماق بىرلىكى ۋە PD-1 ۋە CTLA-4 قاتارلىق باشقا ئاقسىللارنى بىرلا ۋاقىتتا يوقىتىپ، ئاللوگېنلىق CAR T ھۈجەيرىلىرىنى ھاسىل قىلىش ئۈچۈن تەرەققىي قىلدۇرۇلدى، بۇ ئاقسىللارنىڭ راكقا قارشى تۇرۇش خۇسۇسىيىتى تېخىمۇ يۇقىرى بولۇشى مۇمكىن. TNBC غا قارشى (Eyquem قاتارلىقلار، 2017؛ Liu قاتارلىقلار، 2017؛ Ren قاتارلىقلار، 2017b؛ Dimitri قاتارلىقلار، 2022).
CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىش CAR-T ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئۈنۈمىنى يۇقىرى كۆتۈرەلەيدۇ. ئادېنوزىننىڭ ئىممۇنىتېتنى تۆۋەنلىتىش خۇسۇسىيىتىگە ئىگە ئىكەنلىكى مەلۇم، ئۇ T ھۈجەيرىسىنىڭ ئىقتىدارىنى توسۇش ۋە ئادېنوزىن A2A رېتسېپتورلىرىنى (A2AR) ئاكتىپلاشتۇرۇش ئارقىلىق راكقا قارشى ئىممۇنىتېت كۈچىنى تۆۋەنلىتىدۇ (Vigano قاتارلىقلار، 2019). CRISPR/Cas9 ئارقىلىق A2AR نى جىمجىت قىلىش CAR-T ھۈجەيرىلىرىنىڭ تىرىك جانلىقلاردىكى ئۈنۈمىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ياخشىلىدى (Giuffrida قاتارلىقلار، 2021). T ھۈجەيرىلىرىنىڭ ھۈجەيرە كېڭىيىشى، پەرقلىنىشى، ئوكسىدلىنىش سترېسى ۋە گېنوم سترېسى قاتارلىق ھەر خىل فېنوتىپ ئالاھىدىلىكلەرنى نامايان قىلىدىغانلىقى مەلۇم. CRISPR/Cas9 غا ئاساسلانغان T ھۈجەيرىسىنى تەكشۈرۈشتە 25 خىل T ھۈجەيرىسى رېتسېپتورى كىنازاسىنىڭ قالايمىقانلىشىشى بايقالغان. بۇلارنىڭ ئىچىدە، p38 كىنازانىڭ ئۆچۈرۈلۈشى T ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئۆسمىگە قارشى تۇرۇش پائالىيىتىنى كۈچەيتىدىغانلىقى بايقالغان، بۇ p38 كىنازانىڭ CAR-T ھۈجەيرىسىنى تەڭشەشنىڭ ئاساسلىق تەڭشىگۈچىسى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (Gurusamy قاتارلىقلار، 2020).
CRISPR/Cas9 ئارقىلىق T ھۈجەيرىلىرىنى گېن جەھەتتىن ئۆزگەرتكىلى بولۇپ، يۇقىرى ئىپادىلەنگەن TCR لارنى ھاسىل قىلغىلى بولىدۇ. گېن جەھەتتىن ئۆزگەرتىلگەن T ھۈجەيرىلىرىنى بىمارلارغا يۆتكەش ئىچكى T ھۈجەيرىلىرىگە قارىغاندا كۈچلۈك راكقا قارشى تۇرۇش رولىنى كۆرسەتتى. شۇڭا، ئىچكى TCR لار بىمارلاردا گېن جەھەتتىن ئۆزگەرتىلگەن TCR لار بىلەن رىقابەتلىشىشى مۇمكىن، بۇ راك ئىممۇنىتېت داۋالاش ئىقتىدارىغا تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىن. بۇ مەسىلىنى ھەل قىلىش ئۈچۈن، CRISPR/Cas9 نى ئىشلىتىپ قوبۇل قىلغۇچى ھۈجەيرىلەردىكى ئىچكى TCR-β نى چىقىرىۋېتىپ، ئاندىن TCR-β T ھۈجەيرىلىرىنى راك بىمارلىرىغا يۆتكەش ئىچكى TCR جىنسىي رىقابىتىسىز راكقا قارشى تۇرۇش ئىممۇنىتېت ئىنكاسىنى ياخشى كۆرسىتىشى مۇمكىن (Fan et al. 2018). شۇڭا، CRISPR ئۆزگەرتىلگەن T ھۈجەيرىلىرىدىن باشقا، TCR لار نورمال TCR ئارقىلىق يۆتكەلگەن T ھۈجەيرىلىرىگە قارىغاندا ئۆسمە ئانتىگېنىغا مىڭ ھەسسە سەزگۈر. بۇنىڭدىن باشقا، ھەر خىل لېيكېمىيەلەردە، γδ TCR+ CRISPR تەرىپىدىن ھاسىل قىلىنغان ئۆزگەرتىلگەن T ھۈجەيرىلىرى ئۆلچەملىك TCR يۆتكەلمىسىگە قارىغاندا CD4+ ۋە CD8+ T ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئىپادىسىنى يۇقىرى كۆتۈرىدۇ (Legut et al., 2018). شۇڭا، CRISPR/Cas9 تەرىپىدىن ھاسىل قىلىنغان ئۆزگەرتىلگەن T ھۈجەيرىلىرى TNBC نى يېڭىشتە ئۈنۈملۈك ئىممۇنىتېت داۋالاش ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن.
ئىنتېگرىنلار ھۈجەيرە پەردىسىدە مەۋجۇت بولغان ۋە ھۈجەيرىلەرنىڭ ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماترىكسىغا (ECM) باغلىنىشىنى ئىلگىرى سۈرىدىغان ھۈجەيرە چاپلىشىش مولېكۇلاسى (Hamidi ۋە Ivaska, 2018). ئىنتېگرىنلارنىڭ تەڭشىلىشىنىڭ قالايمىقانلىشىشى ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماترىكسىنى ئۆزگەرتىش ئارقىلىق راكنىڭ تەرەققىياتى ۋە كۆچۈشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ، راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ قان ئايلىنىشىدا ياشىشىغا سەۋەب بولىدۇ (Hamidi ۋە Ivaska, 2018). CRISPR/Cas9 ئارقىلىق ئىنتېگرىننىڭ يوقىتىلىشى TNBC دا راكنىڭ ئىلگىرىلىشى، مېتاستازلىنىشى ۋە مۇستەملىكىلىشىشىنى ئاستىلىتىدۇ. ئىنتېگرىن a5 نىڭ (ITGA5) يوقىتىلىشى ئۆپكە راكى قاتارلىق باشقا راكلاردا ھۈجەيرە كۆچۈشى ۋە ئىلگىرىلىشىنى ئازايتىدىغانلىقى خەۋەر قىلىنغان (Ju et al., 2017)، بۇ ئىنتېگرىن a5 نىڭ TNBC نىڭ پاتوگېنىزىدىكى مۇھىم ئامىل بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ئەنئەنىۋى ئېمبىرىئونلۇق غول ھۈجەيرە (ES) ئۇسۇلى ئارقىلىق نوكاۋت چاشقانلارنى ھاسىل قىلىش ئەمگەكنى كۆپ تەلەپ قىلىدىغان، ۋاقىت سەرپ قىلىدىغان ۋە ئۈنۈمسىز بىر جەريان. گومولوگىيىلىك قايتا بىرىكتۈرۈش ئارقىلىق ES ھۈجەيرىلىرىنى نىشان قىلىش، خىمېرلىق چاشقانلارنى كۆپەيتىش ۋە ئاندىن ئۇلارنى ھېتېروزىگوت چاشقانلار بىلەن چېتىشتۇرۇپ، گوموزىگوت ئەۋلادلارنى ھاسىل قىلىش ئۈچۈن بىر نەچچە ئاي ۋە يىل ۋاقىت كېتىدۇ. كۆپ خىل گېن ئۆزگىرىشىگە ئىگە چاشقانلارنى يارىتىش ئۈچۈن مۇرەككەپ چېتىشتۈرۈش تەلەپ قىلىنىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، CRISPR/Cas9 ئارقىلىق ES ھۈجەيرىلىرىنى ئابلاتسىيە قىلىش ياكى CRISPR/Cas9 تەركىبلىرىنى بىر ھۈجەيرىلىك ئۇرۇقلانغان تۇخۇمغا مىكرو ئوكۇل قىلىش ئارقىلىق ھاسىل قىلىنغان چاشقانلارنى ئىشلەتكەندە نۇرغۇن مەسىلىلەر كۆرۈلىدۇ. مەسىلەن، ئۆزگىرىشلەرنىڭ كىرگۈزۈلۈشى كۆپىنچە ئىككى ئاللېللىق ئورۇنلاردا يۈز بېرىدۇ ۋە گېنغا خاس ئەمەس. يېقىندا CRISPR/Cas9 تېخنىكىسىنى ئىشلەتكەن ES ھۈجەيرىلىرىنىڭ بىرلا ۋاقىتتا 5 گېنغا ئىككى ئاللېللىق ئۆزگىرىشلەرنى كىرگۈزەلەيدىغانلىقى خەۋەر قىلىندى (نىشىزونو قاتارلىقلار، 2021). بۇ مەقسەت ئۈچۈن، Cas9 mRNA ۋە بەش گېنغا خاس gRNA بىرلا ۋاقىتتا ES ھۈجەيرىلىرىگە كۆچۈرۈلدى. بۇ، بۇ ئۇسۇلنىڭ ئۈمىدى ۋە ئۈنۈمىنى نامايان قىلىدۇ، گەرچە بۇ مۇتاتسىيەلەر قۇرغۇچى لىنىيىسى بەش كىشىلىك نوكاۋت چاشقانلىرىنى ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن يېتىشتۈرۈلگەندە ئەۋلادلارغا ئۆتكەن بولۇشى مۇمكىن. بۇ تەتقىقات يەنە بىر ھەيران قالارلىق بايقاش توغرىسىدا دوكلات بېرىدۇ: ES ھۈجەيرىلىرى ئەمدى گېنى ئۆزگەرتىلگەن چاشقانلارنى ياساش ئۈچۈن تەلەپ قىلىنمايدۇ. ئەكسىچە، مەلۇم گېن مەھسۇلاتلىرىنى چىقىرىۋېتىش ئۈچۈن، Cas9 mRNA ۋە gRNA بىر ھۈجەيرىلىك باسقۇچلۇق ئېمبىرىيونلارغا ئوكۇل قىلىندى. نەتىجىدە، نەزەرىيە جەھەتتىن چاشقانلاردا گېننىڭ ئۆچۈرۈلۈشىنىڭ ئاقىۋىتىنى تەتقىق قىلىشقا ئىشلىتىشكە بولىدىغان نوكاۋت قۇرغۇچى لىنىيىسى يارىتىلدى (Qin قاتارلىقلار، 2016). شۇڭا، CRISPR/Cas9 ئەنئەنىۋى گېن قۇرۇلۇشىغا قارىغاندا تۆۋەن باھادا TNBC نى داۋالاش ئۈچۈن ترانسگېن چاشقانلارنى يارىتىشقا يول قويىدۇ. CRISPR/Cas سىستېمىسىنى ئىشلىتىپ، TNBC دىكى بىر ياكى بىردىن ئارتۇق ئىچكى گېندا نۇقتا مۇتاتسىيەسىنى مۇۋەپپەقىيەتلىك كىرگۈزەلەيدىغان يېڭى نوكاۋت چاشقان مودېلى ئىجاد قىلىندى. بۇ ئۇقۇمغا ئاساسەن، TNBC نىڭ ھايۋانات مودېللىرىنى CRISPR/Cas9 ئارقىلىق BRCA1 ۋە p53 نى ئۆچۈرۈش ئارقىلىق تەرەققىي قىلدۇرغىلى بولىدۇ، بۇ HR رېمونتىنىڭ يوقىلىشى، گېنومنىڭ مۇقىمسىزلىقى ۋە مۇتانت فېنوتىپلارنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ (Annunziato قاتارلىقلار، 2020).
ھازىر، مامموگرافىيە، ماگنىتلىق رېزونانسلىق رەسىم تەكشۈرۈش (MRI) ۋە ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى قاتارلىق ھەر خىل ئۇسۇللار TNBC نى دىئاگنوز قويۇش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ ئۇسۇللارنىڭ بەزى چەكلىمىلىرى بار. مامموگرافىيە راك ھۈجەيرىلىرىنىڭ باشقا ئەزالارغا كۆچۈپ كەتكەن مېتاستازلىرىنى ئەمەس، بەلكى يەرلىك كۆكرەك توقۇلمىلىرىنى دىئاگنوز قويۇش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى TNBC نى دىئاگنوز قويۇشنىڭ ئىشەنچلىك ئۇسۇلى ئەمەس (Chen ۋە Lee-Felker, 2023). MRI ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى ۋە مامموگرافىيەگە قارىغاندا يۇقىرى سەزگۈرلۈككە ئىگە، ئەمما ئۇنىڭ دىئاگنوز قويۇش توغرىلىقى چەكلىك (Sha ۋە Chen, 2022). توقۇلما بىئوپسىيەسى راك ھۈجەيرىلىرىنى ئېنىقلاشنىڭ تاجاۋۇزچىلىق ئۇسۇلى. قانداقلا بولمىسۇن، بەزى ئەھۋاللاردا، ئەگەر ئىگنە قىزىقىش رايونىدىن يىراقلىشىپ كەتسە، بىئوپسىيە راك توقۇلمىلىرىنى قولدىن بېرىپ قويۇشى مۇمكىن. بۇنىڭدىن باشقا، ئۇ ناھايىتى قىممەت بولۇپ، بىمارغا زىيانلىق بولۇشى مۇمكىن. TNBC كۆپ خىل راك تۈرى بولغاچقا، بىئوپسىيە راك تۈرى ھەققىدە يېتەرلىك ئۇچۇر بەرمەسلىكى مۇمكىن. شۇڭا، TNBC نى بايقاش ئۈچۈن يېڭى دىئاگنوز قويۇش جەھەتتىن ئىشەنچلىك ئۇسۇلغا جىددىي ئېھتىياج بار. CRISPR/Cas9 كۆكرەك راكىنى دىئاگنوز قويۇش ئۈچۈن يۇقىرى سەزگۈرلۈك ۋە ئەڭ ئاز تاجاۋۇزچىلىق قىلىش ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن. بۇنىڭ ئۈچۈن، CRISPR/Cas9 ئاساسلىق ئىستراتېگىيەلەر TNBC نى دىئاگنوز قويۇش ئۈچۈن PCR ئۇسۇللىرىنى ياخشىلاشقا ئىشلىتىلىدۇ. ئالدى بىلەن، CRISPR سىستېمىسىنىڭ Cas9 ۋە cpf1 ئاقسىللىرى ئالاھىدە بولمىغان DNA نى چىقىرىۋېتىشكە ئىشلىتىلىدۇ، ئاندىن بۇ ئىككى ئاقسىل (Cas9 ۋە cpf1) نىشان DNA غا باغلىنىشتىن بۇرۇن PAM تىزىملىكىنى تونۇيالايدۇ (Deepak Singh قاتارلىقلار، 2021). شۇڭا، PCR راك كېسىلىنىڭ تەرەققىياتى بىلەن مۇناسىۋەتلىك مۇتاتسىيەلەرنى ئېنىقلىيالايدۇ. نۇرغۇن تەتقىقاتلار ھەر خىل راك كېسەللىكلىرىدىكى ھەر خىل مۇتاتسىيەلەرنى بايقاش ئۈچۈن بۇ CRISPR ئاساسلىق ئىستراتېگىيەسىنى قوللانغان (Safari قاتارلىقلار، 2019). شۇڭا، CRISPR ئاساسلىق PCR ئۇسۇللىرى TNBC دىئاگنوزىنىڭ بىئوپسىيە ئاساسلىق ئىممۇنوگىستوخېمىيە قاتارلىق تاجاۋۇزچىلىق ئۇسۇللىرىغا تايىنىشىنى ئازايتىشى مۇمكىن.
TNBC دا گورمون رېتسېپتورىنىڭ تەڭشىلىشىدىكى گېنوتىپ ئۆزگىرىشلەرمۇ كۆرسىتىلدى (Chen ۋە Russo, 2009). داۋالاش نۇقتىسىدا دىئاگنوز قويۇش ئۈچۈن مىكرو ئارىلاشما ئىشلىتىپ CRISPR/Cas9 ئاساسلىق PCR ئىستراتېگىيىسى بۇ مۇتاتسىيەلەرنى ئۈنۈملۈك نازارەت قىلالايدۇ (Hajian قاتارلىقلار، 2019). ئۇ يەنە داۋالاش خادىملىرىغا TNBC بىمارلىرىدىكى ئالاھىدە مۇتاتسىيەلەر توغرىسىدا مۇناسىۋەتلىك ئۇچۇرلارنى تەمىنلەپ، ئۇلارنىڭ داۋالاش ئۇسۇلىنى ياخشىلاشقا ياردەم بېرەلەيدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ بىرلەشتۈرۈلگەن تېخنىكىنىڭ چەكلىمىلىرى بار. شۇڭا، بۇ CRISPR/Cas-PCR ئۇسۇلىنى داۋالاشتا TNBC دىئاگنوزى قويۇش ئۈچۈن ئىشلىتىشتىن بۇرۇن كەڭ كۆلەمدە تەتقىقات ئېلىپ بېرىشقا توغرا كېلىدۇ (Yang قاتارلىقلار، 2019).